د څارویو نسج مستقیم PCR کټ - UNG (پرته د نمونې وسیلې) پروتوکول
توضیحات
دا کټ د PCR عکس العملونو لپاره د څارویو نسجونو نمونو څخه د جینومیک DNA د ژر تر ژره خوشې کولو لپاره یو ځانګړی لیسیز بفر سیسټم کاروي ، نو دا په ځانګړي توګه د لوی پیمانه جینیاتي ازموینې لپاره مناسب دی.
د لیسیز بفر څخه د جینومیک DNA خوشې کولو پروسه په 10-30 دقیقو کې په 65 درجو کې بشپړیږي.نورې پروسې لکه پروټین او RNA لرې کولو ته اړتیا نشته، او خوشې شوي ټریس DNA د PCR عکس العمل لپاره د نمونې په توګه کارول کیدی شي.
2×PCR اسانهTMمکس (UNG) د dTTP پرځای dUTP کاروي د 2×PCR اسانه پر بنسټTMمخلوط کړئ، او د UNG انزایم (Uracil-N-glycosylase) اضافه کوي چې کولی شي په ورته وخت کې د dUTP لرونکی ټیمپلیټ خراب کړي.د PCR عکس العمل دمخه ، UNG انزایم د PCR محصول تخریب کولو لپاره کارول کیږي چې uracil لري.د UNG انزایم به په هغه ټیمپلیټ باندې هیڅ اغیزه ونلري چې uracil نلري، پدې توګه د لوړولو ځانګړتیا او دقت ډاډمن کوي او د لوی پیمانه جنیټیک ازموینې پرمهال د PCR محصولاتو ککړتیا مخه نیسي.
D-Taq DNA پولیمیریز د DNA پولیمیریز دی چې په ځانګړي ډول د PCR مستقیم عکس العملونو لپاره د فارجین لخوا رامینځته شوی.د D-Taq DNA پولیمیریز د PCR عکس العمل مختلف ډولونو ته قوي زغم لري، او کولی شي په اغیزمنه توګه په مختلفو پیچلي غبرګون سیسټمونو کې د DNA اندازه اندازه کړي، او د پراخولو سرعت کولی شي 2Kb/min ته ورسیږي، کوم چې په ځانګړې توګه د مستقیم PCR غبرګون لپاره مناسب دی.
د کټ اجزا
لومړۍ برخه | بفر AL |
Foregene Protease | |
6× د DNA بار کولو بفر | |
دویمه برخه | 2×PCR اسانهTMمخلوط (UNG) |
ځانګړتیاوې او ګټې
■هیڅ وخت مصرف او ګران DNA پاکول
■ د نمونې غوښتنه لږه ده، د 5mg په اندازه د څارویو نسج ازموینه کیدی شي.
■ هیڅ ځانګړي درملنې ته اړتیا نشته لکه پیس کول او کرش کول، او عملیات ساده دي.
■ د PCR اصلاح شوی سیسټم د PCR لوړ ځانګړتیا او د PCR عکس العمل مخنیوی کونکو ته قوي زغم رامینځته کوي.
■ د ککړتیا ضد PCR سیسټم 2×PCR اسانهTMمکس (UNG) په مؤثره توګه د PCR محصولاتو لخوا رامینځته شوي ککړتیا له مینځه وړي او د لوړولو ځانګړتیا او دقت تضمینوي.
د کټ پیرامیټونه
غوښتنلیک: د څارویو د نسجونو ډول.
DNA د نمونې لیسز څخه خوشې شوی: یوازې د PCR ټیمپلیټ په توګه کارول کیږي.
کټ د لاندې موخو لپاره کارول کیدی شي: د ټرانسجینوس پیژندنه، د څارویو جینټایپنګ، او داسې نور.
د کار جریان
د ذخیره کولو او شیلف ژوند
د دې کټ لومړۍ برخه باید په 2-8 کې زیرمه شي℃.
د ریجنټ بفر AL په وچو شرایطو کې د 12 میاشتو لپاره زیرمه کیدی شي؛دا په 2-8 کې زیرمه کیدی شي℃د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره.
Reagent Foregene Protease یو ځانګړی فورمول لري.د دې د فعالیت او ثبات ډاډ ترلاسه کولو لپاره، مهرباني وکړئ دا په 4 کې ذخیره کړئ℃د 12 میاشتو لپاره.
Reagent 6×د DNA بار کولو بفر په 4 کې زیرمه کیدی شي℃یا -20℃د اوږد مهال لپاره.
د دې کټ دویمه برخه باید په -20 کې زیرمه شي℃.
Reagent 2×PCR اسانهTMمکس (UNG)، که دا په مکرر ډول وکارول شي ، دا په 4 کې هم زیرمه کیدی شي℃د لنډ مهاله ذخیره کولو لپاره (د 10 ورځو دننه کارول).