Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Purification Kits له حجرې څخه
د کټ تفصیل:
لوړ پاک شوی او د لوړ کیفیت ټول RNA په 11 دقیقو کې د مختلفو کلتوري حجرو څخه ترلاسه کیدی شي.
RNase وړیا
د خونې د حرارت درجه (15-25 ℃) کې کار کوي
د DNA پاکولو کالم سره
لوړ RNA حاصل
ګړندی: په 11 دقیقو کې استخراج بشپړ کړئ
خوندیتوب: هیڅ عضوي کیمیاوي نه
تفصیل
دا کټ د سپن کالم او فارمول څخه کار اخلي چې د فارجین لخوا رامینځته شوی، کوم چې کولی شي په اغیزمنه توګه د لوړ پاکوالي او لوړ کیفیت ټول RNA د 96، 24، 12، او 6 څاه پلیټونو کې کلتور شوي حجرو څخه استخراج کړي.
دا کټ د DNA - پاکولو موثر کالم چمتو کوي، کوم چې کولی شي په اسانۍ سره سوپرناټینټ او سیل لیسټیټ جلا کړي، جینومیک DNA تړل او لرې کړي.عملیات ساده او وخت خوندي کوي.
Tد RNA-یوازې کالم کولی شي په اغیزمنه توګه RNA د یو ځانګړي فورمول سره وتړي.د نمونو لوی شمیر په ورته وخت کې پروسس کیدی شي.
د کټ اجزا
| د کټ ترکیب | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 ټ | 200 ټ | |
| بفر cRL1* | 25 ملی لیتر | 100 ملی لیتر |
| بفر cRL2 | 15 ملی لیتر | 60 ملی لیتر |
| بفر RW1* | 25 ملی لیتر | 100 ملی لیتر |
| بفر RW2 | 24 ملی لیتر | 96 ملی لیتر |
| RNase وړیا ddH2O | 10 ملی لیتر | 40 ملی لیتر |
| RNA-یوازې کالم | 50 | ۲۰۰ |
| د DNA پاکولو کالم | 50 | ۲۰۰ |
| لارښوونه | 1 | 1 |
*مهرباني وکړئ دستکشې واغوندئ او د عملیاتو په جریان کې محافظتي تدابیر ونیسئ ځکه چې بفر cRL1 او بفر RW1 د خارښ کونکي چاوټروپیک مالګې لري.
ځانګړتیاوې او ګټې
■ ټوله پروسه د خونې په حرارت (15-25℃) کې پرته له یخ حمام او د ټیټ تودوخې سنټرفیوګیشن څخه ترسره کیږي.
■ ټوله کټ د RNase څخه پاک دی، د RNA تخریب په اړه اندیښنه ته اړتیا نشته.
■ د DNA - پاکولو کالم په ځانګړې توګه DNA تړلی دی، نو دا کټ کولی شي د اضافي DNase اضافه کولو پرته د جینومیک DNA ککړتیا لرې کړي.
■ لوړ RNA حاصل: RNA یوازې کالم او ځانګړی فورمول کولی شي په اغیزمنه توګه RNA پاک کړي.
■ ګړندی سرعت: د کار کولو لپاره اسانه او په 11 دقیقو کې بشپړ کیدی شي.
■ خوندیتوب: هیڅ عضوي ریجنټ ته اړتیا نشته.
■ لوړ کیفیت: پاک شوی RNA لوړ پاکوالی لري، د پروټین او نورو ناپاکو موادو څخه پاک دی، او کولی شي د بیالبیلو تجربو سره مخ شي.
د کټ غوښتنلیک
دا د 96، 24، 12، او 6 څاه پلیټونو کې د کلتور شوي حجرو څخه د ټول RNA استخراج او پاکولو لپاره مناسب دی.
د کار جریان
ډياګرام
د Agarose جیل بیټرۍ ډیاګرام د Cell Total RNA Isolation Kit د پورته مختلف شمیر حجرو درملنه کوي، 20μl حجم elution، 2μl پاک شوي ټول RNA 1٪ اخلي.
د ذخیره کولو او شیلف ژوند
کټ د 12 میاشتو لپاره د خونې د حرارت درجه (15-25 ℃) یا 2-8 ℃ د اوږدې مودې (24 میاشتو) لپاره زیرمه کیدی شي.
بفر cRL1 د 2-hydroxy-1-ethanethiol (اختیاري) اضافه کولو وروسته د 1 میاشتې لپاره په 4 ℃ کې زیرمه کیدی شي.
RNA نه استخراج کیږي یا د RNA حاصلات کم دي
ډیری وختونه ډیری فکتورونه شتون لري چې د بیا رغونې موثریت اغیزه کوي، لکه: د نسج نمونې RNA منځپانګې، د عملیاتو طریقه، د اخراج حجم، او داسې نور.
1. یخ حمام یا کریوجینک (4 ° C) سینټرفیوګریشن د عملیاتو په جریان کې ترسره شو.
سپارښتنه: د ټولې پروسې په اوږدو کې د خونې په حرارت (15-25 ° C) کې کار وکړئ، په ټیټ حرارت کې د یخ حمام او سینټرفیوج مه کوئ.
2. د نمونې ناسم ساتل یا د نمونې د ذخیره کولو ډیر وخت.
سپارښتنه: نمونې په -80 °C کې ذخیره کړئ یا په مایع نایتروجن کې کنګل کړئ او د بار بار کنګل کولو څخه ډډه وکړئ؛هڅه وکړئ د RNA استخراج لپاره تازه نسج یا کلتور شوي حجرې وکاروئ.
3. ناکافي نمونه lysis.
سپارښتنه: کله چې نسج همغږي کوي، ډاډ ترلاسه کړئ چې نسج په کافي اندازه همغږي شوي او د نسج حجرې په کافي اندازه ویشل شوي ترڅو د RNA خوشې کولو تشریح کړي.
4. ایلوینټ په سمه توګه نه دی اضافه شوی.
سپارښتنه: تایید کړئ چې RNase-Free ddH2O د پاکولو کالم جھلی په مینځ کې په ښکته خوا کې اضافه کیږي.
5. د مطلق ایتانول صحیح حجم په بفر RL2 یا بفر RW2 کې ندی اضافه شوی.
سپارښتنه: لارښوونې تعقیب کړئ، په بفر RL2 او Buffer RW2 کې د مطلق ایتانول صحیح حجم اضافه کړئ او د کټ کارولو دمخه ښه مخلوط کړئ.
6. د نسج نمونې خوراک مناسب نه دی.
سپارښتنه: د 10-20 ملی ګرامه نسج یا (1-5) × 10 څخه کار واخلئ6حجرې په هر 500 μl بفر RL1 کې، ځکه چې د نسج ډیر کارول کیدای شي د RNA استخراج کم کړي.
7. د اخراج ناسم حجم یا نیمګړتیا.
سپارښتنه: د پاکولو کالم د elution حجم 50-200 μl دی؛که د elution اغیز د قناعت وړ نه وي، نو سپارښتنه کیږي چې د خونې د تودوخې ځای پرځای کولو وخت وغزول شي وروسته له دې چې د ګرم شوي RNase-Free ddH اضافه کړي.2او، د مثال په توګه د 5-10 دقیقو لپاره.
8. د پاکولو کالم د بفر RW2 مینځلو وروسته د ایتانول پاتې شوني لري.
سپارښتنه: که چیرې د بفر RW2 مینځلو وروسته د ایتانول پاتې شوني شتون ولري ، د 1 دقیقو لپاره خالي ټیوب سینټرفیوګریشن ، د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن عملیاتو لپاره وخت 2 دقیقو ته لوړ کیدی شي ، یا د پاکولو کالم د 5 دقیقو لپاره د خونې په حرارت درجه کې کیښودل کیدی شي ترڅو په مناسب ډول د پاتې کیدو څخه لرې شي.
پاک شوی RNA تخریب شوی
د پاک شوي RNA کیفیت په فکتورونو پورې اړه لري لکه د نمونې ساتنه، د RNase ککړتیا، او لاسوهنه، او داسې نور.
1. د نسج نمونې په وخت کې نه ساتل کیږي.
سپارښتنه: که د نسجونو نمونې یا حجرې د راټولولو وروسته په وخت سره ونه کارول شي، سمدلاسه په -80 ° C یا مایع نایتروجن کې کریوپریزیر کړئ.د RNA استخراج لپاره، هرکله چې امکان ولري د نوي اخیستل شوي نسج یا حجرو نمونه وکاروئ.
2. د نسجونو د نمونو تکرار کنګل کول.
سپارښتنه: کله چې د نسجونو نمونې ذخیره کړئ، دا غوره ده چې د ساتنې لپاره یې په کوچنیو ټوټو کې پرې کړئ، او د کارولو په وخت کې یوه ټوټه لرې کړئ ترڅو د نمونې د بار بار کنګل کیدو او د RNA تخریب مخه ونیسي.
3. RNase د عملیاتو په جریان کې معرفي کیږي یا د ضایع کیدو وړ دستکشې، ماسک او نور نه اغوندي.
سپارښتنې: د RNA استخراج تجربې په جلا جلا RNA تخریب خونو کې ترسره کیږي او میز د تجربې دمخه پاک شوی.
د تجربې په جریان کې د ضایع کیدو وړ دستکشې او ماسکونه واغوندئ ترڅو د RNase معرفي کیدو له امله رامینځته شوي RNA تخریب کم کړي.
4. Reagents د کارولو په وخت کې د RNase سره ککړ شوي دي.
سپارښتنه: د اړوندو تجربو لپاره د نوي حیواناتو ټول RNA جلا کولو کټ سره بدل کړئ.
5. د سینټرفیوج ټیوبونه، ټیوبونه، او نور د RNA په مینځلو کې کارول کیږي د RNase سره ککړ شوي.
سپارښتنه: تایید کړئ چې د سینټرفیوج ټیوبونه، لارښوونې، پایپټ، او نور د RNA استخراج کې کارول کیږي ټول د RNase څخه پاک دي.
پاک شوي ترلاسه شوي RNA د لاندې زیرمو تجربو اغیزه کوي
RNA د پاکولو کالم لخوا پاک شوی، که چیرې د مالګې آئنونه، د پروټین مینځپانګه ډیره زیاته وي د لاندې زیرمې تجربه اغیزه کوي، لکه: ریورس لیږد، شمالي بلاټ او نور.
1. خارج شوی RNA د مالګې آئن پاتې شونه لري.
سپارښتنه: تصدیق کړئ چې د ایتانول صحیح حجم بفر RW2 کې اضافه شوی او د 2 پاکولو کالم مینځل په سینټرفیوګل سرعت کې ترسره کړئ چې د عملیاتو لپاره ښودل شوي؛که چیرې د مالګې آئن پاتې شي، د پاکولو کالم د خونې په حرارت کې د 5 دقیقو لپاره بفر RW2 ته پریږدئ او سینټرفیوګریشن ترسره کړئ ترڅو د مالګې ککړتیا له مینځه یوسي.
2. په خارج شوي RNA کې د ایتانول پاتې شوني.
سپارښتنه: تایید کړئ چې د بفر RW2 مینځلو وروسته، د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن عملیات د سنټرفیوګریشن سرعت سره ترسره کړئ چې د عملیاتو لپاره ښودل شوي، د خالي ټیوب سنټرفیوګریشن عملیاتو وخت 2 دقیقو ته لوړ کړئ که چیرې لاهم د ایتانول پاتې شي، یا د خونې په حرارت درجه کې د 5 مترو لپاره پریږدئ.
