د ستونزو تحلیل لارښود

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

ټیټ حاصل یا هیڅ DNA

معمولا ډیری فکتورونه شتون لري چې د جینومیک DNA په حاصل باندې اغیزه کوي، پشمول د نمونې سرچینه، د نمونې عمر، د نمونې ذخیره کولو شرایط، او عملیات.

جینومیک DNA د استخراج پرمهال نشي ترلاسه کیدی

1. د نسجونو نمونې په ناسمه توګه ذخیره شوي یا د ډیرې اوږدې مودې لپاره زیرمه شوي، چې پایله یې د جینومیک DNA تخریب کیږي.

سپارښتنه: د نسج نمونې په مایع نایتروجن یا -20 کې ذخیره کړئ°ج;هڅه وکړئ د جینومیک DNA استخراج لپاره نوي راټول شوي نمونې وکاروئ.

2. د نمونې خورا لږ مقدار ممکن د اړونده جینومیک DNA د ایستلو لامل نشي.

وړاندیز: د نسجونو نمونو لپاره چې د اوږدې مودې لپاره زیرمه شوي یا د جینومیک DNA سخت تخریب لري ، د نسج نمونو مقدار په مناسب ډول لوړ کیدی شي ترڅو د پام وړ جینومیک DNA استخراج شي.د نمونې اندازه د DNA اړتیاو سره سم ټاکل کیدی شي، مګر تازه نمونه باید له 100mg څخه زیاته نه وي، او وچه نمونه باید د 30mg څخه زیاته نه وي.

3. نمونه د مايع نايتروجن سره نه وي يا د مايع نايټروجن وروسته د ډير وخت لپاره ايښودل کيږي.

وړاندیز: د DNA استخراج په جریان کې، نمونه باید په بشپړه توګه د مایع نایتروجن سره مینځ ته شي ترڅو د حجرو دیوال مات کړي؛د پیسولو وروسته، مهرباني وکړئ د نمونې پوډر PL1 ته په 65 کې پری ګرم کړئ°C هرڅومره ژر چې امکان ولري (یوځل چې د ځمکې پوډر وچ شي، د جینومیک DNA به په چټکۍ سره تخریب پیل کړي).

4. د Foregene Protease ناسم ذخیره کول د فعالیت د کمیدو یا غیر فعالیدو لامل کیږي.

سپارښتنه: د Foregene Protease د ذخیره کولو شرایط تایید کړئ یا د انزیماتیک هایدرولیسس لپاره د نوي فارجین پروټیز سره بدل کړئ.

5. کټ په ناسمه توګه ذخیره شوی یا د ډیر وخت لپاره زیرمه شوی، د کټ ځینې برخې د ناکامۍ لامل کیږي.

سپارښتنه: د اړوندو عملیاتو لپاره د نوي نبات جینومیک DNA استخراج کټ واخلئ.

6. د کټ ناسم کارول.

وړاندیز: د نبات DNA جلا کولو کټ پیرود کړئ چې د نبات جینومیک DNA استخراج او پاکولو لپاره نمونو ته وقف شوی.

7. بفر WB پرته له اضافه a aناپاک ایتانول

سپارښتنه: ډاډ ترلاسه کړئ چې د بفر WB ته د مطلق ایتانول صحیح حجم اضافه کړئ.

8. د سیلیکا جھلی په سمه توګه ایلوینټ نه دی اچول شوی.

وړاندیز: په 65 کې دمخه تودوخه ایلوینټ اضافه کړئ℃د سیلیکا جیل جھلی مینځ ته کیږدئ، او د 5 دقیقو لپاره د خونې په حرارت کې پریږدئ ترڅو د elution موثریت زیات کړي.

استخراج د ټیټ حاصل جینومیک DNA ترلاسه کولو لپاره

1. نمونه په ناسمه توګه ذخیره کیږي یا د ډیر وخت لپاره زیرمه کیږي، په پایله کې د جینومیک DNA تخریب کیږي.

سپارښتنه: د نسج نمونې په -20 کې ذخیره کړئ℃;هڅه وکړئ د جینومیک DNA استخراج لپاره نوي راټول شوي نسج نمونې وکاروئ.

2. که د نسجونو د نمونو اندازه ډیره لږه وي، استخراج شوي جینومیک DNA به لږ وي.

وړاندیز: د نبات ځینې نمونې په اوبو کې بډایه دي لکه آبي بوټي لکه الګا او داسې نور، خوراک باید په مناسبه توګه لوړ شي یا د عملیاتو څخه لږ مخکې اوبه ډیهایډریټ شي.

3. نمونې په بشپړه توګه د مایع نایتروجن سره ندي مینځل شوي یا د پیس کولو وروسته د ډیر وخت لپاره د خونې په حرارت کې پاتې شوي.

وړاندیز: د مایع نایتروجن پیس کول باید کافي وي، او د نمونې حجرې دیوال باید د امکان تر حده مات شي؛د پیسولو سمدستي وروسته، د نمونې پوډر باید 65 ته لیږدول شي℃د بل مرحلې لپاره مخکې ګرم بفر PL1.

4. د سم کټ نه کارول.

سپارښتنه: د نبات جینومیک DNA استخراج او پاکولو لپاره د نبات DNA جلا کولو کټ وکاروئ.

5. د Foregene Protease ناسم ذخیره کول د فعالیت د کمیدو یا غیر فعالیدو لامل کیږي.

سپارښتنه: د Foregene Protease د ذخیره کولو شرایط تایید کړئ یا د انزیماتیک هایدرولیسس لپاره د نوي فارجین پروټیز سره بدل کړئ.

6. د Eluent ستونزه

سپارښتنه: مهرباني وکړئ د elution لپاره بفر EB وکاروئ؛که چیرې ddH کاروئ₂O یا نور eluents، ډاډ ترلاسه کړئ چې د eluent pH د 7.0-8.5 ترمنځ دی.

7. الیونټ په سمه توګه نه توی شوی

وړاندیز: مهرباني وکړئ د سیلیکا جھلی په مینځ کې د ایلوشن څاڅکي اضافه کړئ او د کوټې په حرارت کې د 5 دقیقو لپاره پریږدئ ترڅو د elution موثریت زیات شي.

8. د الیونټ حجم ډیر کوچنی دی

وړاندیز: مهرباني وکړئ د لارښوونو مطابق د جینومیک DNA elution لپاره eluent وکاروئ، لږترلږه له 100 څخه کم نهμl.

د ټیټ پاکوالي سره جینومیک DNA استخراج شوی

د جینومیک DNA ټیټ پاکوالی به د لاندې جریان تجربو ناکامي یا ضعیف تاثیر لامل شي ، لکه: انزایم نشي پرې کیدی ، او د هدف جین ټوټه د PCR لخوا نشي ترلاسه کیدی.

1. د متفرقه پروټین ککړتیا، د RNA ککړتیا.

تحلیل: بفر PW د کالم مینځلو لپاره ندي کارول شوي؛بفر PW د درست سینټرفیوګریشن سرعت سره د کالم مینځلو لپاره ندي کارول شوي.

وړاندیز: هڅه وکړئ چې ډاډ ترلاسه کړئ چې سپرناټینټ کې هیڅ باران شتون نلري کله چې سپرناټینټ د کالم څخه تیریږي؛ډاډ ترلاسه کړئ چې د لارښوونو سره سم د بفر PW سره د پاکولو کالم ومینځئ، او دا مرحله نشي پریښودل کیدی.

2. د ناپاکۍ آیون ککړتیا.

تحلیل: د بفر WB واش کالم پریښودل شوی یا یوازې یو ځل مینځل شوی، په پایله کې د پاتې ionic ککړتیا سبب کیږي.

سپارښتنه: ډاډه اوسئ چې د بفر WB سره دوه ځله مینځل د لارښوونو سره سم د امکان تر حده د پاتې آئنونو لرې کولو لپاره.

3. د RNase ککړتیا.

تحلیل: Exogenous RNase بفر ته اضافه کیږي؛په بفر PW کې د مینځلو غلط عملیات به د پاتې کیدو RNase پایله ولري او د لاندې جریان RNA تجربوي عملیاتو اغیزه وکړي ، لکه د ویټرو لیږد کې.

وړاندیز: د Foregene لړۍ د نیوکلیک اسید استخراج کټونه کولی شي پرته له اضافي RNase څخه RNA لرې کړي، او د نبات DNA جلا کولو کټ کې ټول ریجنټونه RNase ته اړتیا نلري؛ډاډ ترلاسه کړئ چې د لارښوونو سره سم د بفر PW سره د پاکولو کالم ومینځئ، او دا مرحله نشي پریښودل کیدی.

4. د ایتانول پاتې شوني.

تحلیل: د بفر WB سره د پاکولو کالم مینځلو وروسته ، هیڅ خالي ټیوب سینټرفیوګریشن ندی ترسره شوی.

سپارښتنه: د مناسب خالي ټیوب سینټرفیوګریشن لپاره لارښوونې تعقیب کړئ.

لارښود لارښود:

د نبات د DNA جلا کولو کټ لارښوونې لارښود