د ستونزو تحلیل لپاره لارښوونې

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

هیڅ RNA نشي ایستل کیدی یا د نیوکلیک اسید حاصل کم وي

معمولا ډیری فکتورونه شتون لري چې د بیا رغونې موثریت اغیزه کوي، لکه: د نمونې RNA منځپانګې، د عملیاتو طریقه، د اخراج حجم، او نور.

د عامو لاملونو تحلیل:

1. د یخ حمام یا د ټيټ تودوخې (4 ° C) د عملیاتو پرمهال سینټرفیوګیشن.

وړاندیز: د کوټې د حرارت درجه (15-25 ° C) عملیات، هیڅکله د یخ حمام او د ټیټ تودوخې سنټرفیوج.

2. د نمونې ناسم ذخیره کول یا د نمونې ذخیره د ډیر وخت لپاره.

وړاندیز: نمونې په -80 ° C کې ذخیره کړئ یا په مایع نایتروجن کې کنګل کړئ، او د بار بار کنګل کولو څخه ډډه وکړئ؛هڅه وکړئ د RNA استخراج لپاره تازه راټول شوي نمونې وکاروئ.

3. ناکافي نمونه lysis

سپارښتنه: مهرباني وکړئ ډاډ ترلاسه کړئ چې نمونه او کاري محلول (لینیر اکریلامایډ) په ښه توګه مخلوط شوي او د 10 دقیقو لپاره د خونې په حرارت درجه کې (15-25 ° C)

4. په غلطه توګه الیونټ اضافه شوی

سپارښتنه: ډاډ ترلاسه کړئ چې RNase-Free ddH2O د پاکولو کالم د غشا په مینځ کې اضافه شوي

5. په بفر viRW2 کې د انهایډروس ایتانول ناسم حجم

وړاندیز: مهرباني وکړئ لارښوونې تعقیب کړئ، د بفر viRW2 کې د انهایډروس ایتانول صحیح حجم اضافه کړئ او د کټ کارولو دمخه یې ښه مخلوط کړئ.

6. د نمونې ناسم کارول.

وړاندیز: په هر 500μl بفر viRL کې 200µl نمونه.د نمونې ډیر مقدار به د RNA استخراج د کمیدو لامل شي.

7. نامناسب اخراج حجم یا نیمګړتیا.

وړاندیز: د پاکولو کالم الیونټ حجم 30-50μl دی؛که د elution اغیز د قناعت وړ نه وي، نو سپارښتنه کیږي چې مخکې ګرم RNase-Free ddH اضافه کړئ.₂O او د خونې په حرارت کې د ځای کولو وخت وغځوئ، لکه 5-10min

8. د پاکولو کالم په بفر viRW2 کې له مینځلو وروسته د ایتانول پاتې شوني لري.

وړاندیز: که چیرې ایتانول په بفر viRW2 کې له مینځلو وروسته او د 2 دقیقو لپاره خالي ټیوب سینټرفیوګریشن کې پاتې شي ، د پاکولو کالم د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن وروسته د 5 دقیقو لپاره د خونې په حرارت کې پریښودل کیدی شي ترڅو پاتې ایتانول په بشپړ ډول لرې کړي.

د پاکو RNA مالیکولونو تخریب

د پاک شوي RNA کیفیت په فکتورونو پورې اړه لري لکه د نمونې ذخیره کول، د RNase ککړتیا، او عملیات.

د عامو لاملونو تحلیل:

1. راټول شوي نمونې په وخت کې خوندي شوي ندي.

وړاندیز: که نمونه د راټولولو وروسته په وخت کې ونه کارول شي، مهرباني وکړئ دا په -80 ℃ یا مایع نایټروجن کې په سمدستي توګه ذخیره کړئ.د RNA مالیکولونو استخراج لپاره، هڅه وکړئ هرکله چې امکان ولري تازه راټول شوي نمونې وکاروئ.

2. راټول شوي نمونې یخ شوي او په مکرر ډول پړسیدلي.

وړاندیز: د نمونې راټولولو او ذخیره کولو په جریان کې د بار بار یخولو او پړسیدو څخه ډډه وکړئ (له یو ځل څخه زیات نه)، که نه نو د نیوکلیک اسید حاصل به کم شي.

3.RNase په عملیاتي خونه کې معرفي شوی و یا د ضایع کیدو وړ دستکشې، ماسک او نور نه و اغوستل شوي.

وړاندیز: د RNA مالیکول استخراج تجربه په یو جلا RNA عملیات خونه کې غوره ترسره کیږي، او د تجربې میز د تجربې څخه مخکې پاک شوی.د تجربې په جریان کې د ضایع کیدو وړ دستکشې او ماسکونه واغوندئ ترڅو د RNase معرفي کیدو له امله د RNA تخریب مخه ونیسي.

4. ریجنټ د کارولو پرمهال د RNase لخوا ککړ شوی.

وړاندیز: د اړوندو تجربو لپاره د نوي ویروس RNA جلا کولو کټ سره بدل کړئ.

5. د سینټرفیوج ټیوبونو د RNase ککړتیا، د پایپټ لارښوونې، او داسې نور. وړاندیز: ډاډ ترلاسه کړئ چې د سینټریفیوج ټیوبونه، پایپټ ټیوبونه، او پایپټ ټول د RNase څخه پاک دي.

پاک شوي RNA مالیکولونه د لاندې جریان تجربې اغیزمنې کړې

د RNA مالیکولونه چې د پاکولو کالم لخوا پاک شوي د لاندې تجربو اغیزه کوي که چیرې د مالګې ایونونه یا پروټینونه ډیر وي، لکه: ریورس لیږد، شمالي بلاټ، او نور.

1. په تخریب شوي RNA مالیکولونو کې پاتې مالګې ایونونه شتون لري.

سپارښتنه: ډاډ ترلاسه کړئ چې د انهایډروس ایتانول صحیح حجم بفر viRW2 کې اضافه شوی ، او د عملیاتي لارښوونو له مخې د درست سینټرفیوګریشن سرعت سره سم د پاکولو کالم دوه ځله ومینځئ؛ که چیرې لاهم مالګې آیونونه پاتې وي ، تاسو کولی شئ د بفر viRW2 د پاکولو کالم ته اضافه کړئ او د کوټې د حرارت درجه 5 دقیقو لپاره پریږدئ.بیا سینټرفیوګریشن ترسره کړئ ترڅو د مالګې آئن ککړتیا تر لوی حده لرې کړي

2. په خارج شوي RNA مالیکولونو کې پاتې ایتانول شتون لري

وړاندیز: یوځل چې تایید شي چې د پاکولو کالمونه د بفر viRW2 لخوا مینځل شوي ، په عملیاتي لارښوونو کې د سینټرفیوګل سرعت سره سم د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن ترسره کړئ.که چیرې لاهم ایتانول پاتې وي ، نو دا د خالي ټیوب سینټرفیوګیشن وروسته د خونې په حرارت کې د 5 دقیقو لپاره پریښودل کیدی شي ترڅو پاتې ایتانول تر لوی حد پورې لرې کړي.

لارښود لارښود:

د ویروس RNA جلا کولو کټ لارښوونې لارښود