لیکوالان: وانګ شیاویان، ژاو ایریو

واحد: جیاوزو روغتون، د دونګ فانګ روغتون د تونګجي پوهنتون پورې تړلی

اوس مهال، د تنفسي رنځجن نیوکلیک اسید کشف لپاره اصلي نمونه د ستوني سویب دی.د نمونې ساتنې ډیری ډولونه شتون لري چې معمولا کارول کیږي، چې ټول یې د ترانسپورت او ذخیره کولو لپاره یخچال یا منجمد ته اړتیا لري؛د راټولولو او ترانسپورت پروسې په جریان کې د ټیټ تودوخې ټوله پروسه کنټرول کول ستونزمن دي ، او د نمونې ازموینې دمخه د کیفیت کنټرول ډاډ ترلاسه کول ګران دي.^[1-2].

RNase (RNase) یو Endonuclease دی چې RNA هایدروولیز کوي، په عمده توګه د نیوکلیوټایډونو ترمنځ فاسفوډیسټر بانډونه ماتوي.د RNase مالیکول خورا باثباته دی، په جوړښت کې د ډیسلفایډ بانډونه شتون لري، او فعالیت یې د divalent cations شتون ته اړتیا نلري، نو ځکه RNase په اسانۍ سره نه ردیږي، او حتی د لوړې تودوخې یا د ډینټورینټونو کارولو وروسته بیا جوړیدل اسانه دي.RNases په endogenous او exogenous ویشل شوي دي.Endogenous RNases په عین وخت کې خوشې کیدی شي کله چې حجرې مات شي.نو ځکه، د Endogenous RNases رول له منځه وړل د RNA استخراج پروسې کې خورا مهم ګام دی.Exogenous RNases په پراخه کچه ویشل شوي.RNases په هوا، د انسان په پوستکي، ویښتو او لعاب کې شتون لري، چې د RNA د اسانه تخریب مهم لاملونه دي.^[3].

د معلوماتو پوښتنه

CANS-CL02-A009 "د مالیکولر تشخیص په ساحه کې د طبي لابراتوار کیفیت او د وړتیا اعتبار ورکولو لارښودونو پلي کول" په تخنیکي اړتیاو کې وړاندیز کوي چې د غوښتنلیک سره سم باید د اوبو کیفیت مناسب معیارونه جوړ شي؛د ککړتیا وړ هوا بند کانټینرونه:

RNase/طبقه بندی

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A)، چې د بووین پانقراص څخه اخیستل شوی، یو Endoribonuclease دی چې کولی شي په ځانګړې توګه په RNA کې د pyrimidine د پاتې شونو 3′ پای باندې برید وکړي، د سایتوسین یا یوریکیل قطع کړي چې د نږدې نیوکلیوټایډونو لخوا رامینځته شوي.د فاسفوډیسټر بانډ، د عکس العمل وروستنی محصول د 3′ pyrimidine nucleotide او یو oligonucleotide دی چې په پای کې د 3′ pyrimidine نیوکلیوټایډ سره.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) د Aspergillus orjzae څخه اخیستل شوی، دا په ځانګړې توګه د ګوانین په 3′-ټرمینل فاسفیت باندې عمل کوي، او د 3′ فاسفیت د ګوانین او د 5′ هایدروکسیل د څنګته شوي فاسفیت تر منځ د فاسفیت ځای دی.د عکس العمل وروستی محصول 3′guanylic acid او oligonucleotide ټوټې دي چې په پای کې 3′guanylic اسید لري.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) د لومړي ځل لپاره د خوسکي تایموس نسج څخه کشف شو، او د دې کوډ کولو جین په Escherichia coli کې کلون شوی.دا کولی شي په ځانګړي ډول DNA تخریب کړي: د RNA هایبرډ ډوپلیکسونو کې د RNA سټینډونه ، په پایله کې oligonucleotides او mononucleotides د 3′-OH او 5′-monophosphate پایونو سره ، دا نشي کولی واحد یا دوه اړخیز DNA یا RNA تخریب کړي.

RNase

فعالیت او کارول

Ribonuclease کولی شي د ribonucleic اسید (RNA) تخریب محرک کړي او په مصنوعي ډول ترکیب شي.درمل مرهم په عمده توګه د صدماتو او ګډ درد درملنې لپاره کارول کیږي.د راپورونو له مخې، ریبونیوکلیز کولی شي د کوربه حجرو میټابولیزم بدل کړي، د ویروس ترکیب منع کړي، په ویټرو کې د انفلونزا ویروس خپریدو مخه ونیسي، او د چرګانو په جنینونو کې د واکسینیا او هیرپس ​​ویروس رامینځته کیدو مخه ونیسي.د ریبونیوکلیز کلینیکي کارول د 180 ملی ګرامه ورځنی انټرماسکولر انجیکشن ، د ایپیډیمیک انسیفلایټس درملنې لپاره ګټور دی ، ریبونیوکلیز کولی شي د ریبونیوکلیز اسید (RNA) تخریب رامینځته کړي ، او اوس په مصنوعي ډول ترکیب کیدی شي.درمل مرهم په عمده توګه د صدماتو او ګډ درد درملنې لپاره کارول کیږي.د راپورونو له مخې، ریبونیوکلیز کولی شي د کوربه حجرو میټابولیزم بدل کړي، د ویروس ترکیب منع کړي، په ویټرو کې د انفلونزا ویروس خپریدو مخه ونیسي، او د چرګانو په جنینونو کې د واکسینیا او هیرپس ​​ویروس رامینځته کیدو مخه ونیسي.د ریبونیوکلیز کلینیکي کارول د 180 ملی ګرامه د انټرماسکولر انجیکشن هره ورځ د ایپیډیمیک انسفلایټس درملنې لپاره ګټور دي.

RNase

د مخنیوی تعریف

د RNase inhibitor Unit تعریف: د 5ng RNase A د فعالیت 50٪ مخنیوی لپاره د انزایمونو مقدار یو واحد دی.

د RNase مخنیوی کونکي څنګه کار کوي

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate یو عضوي مرکب دی چې د مالیکولر فورمول C2H6N4S سره.په عمده توګه په بیولوژیکي درملو کې کارول کیږي، کیمیاوي ریجنټونه، او داسې نور. Guanidine isothiocyanate د پروټین لیزینګ اجنټ دی، او دا اکثرا د مالیکولر تشخیصي ریجنټونو کې د لیسز محلول د اصلي برخې په توګه کارول کیږي.دا کولی شي نسج لیز کړي، د حجرو جوړښت ویجاړ کړي او نیوکلییک اسید له نیوکلیوپروټین څخه جلا کړي، او RNase ته قوي تخریب لري.دا په اوسني وخت کې ترټولو اغیزمن RNase مخنیوی دی.

TRIzol یو نوی ټول RNA استخراج ریجنټ دی چې کولی شي په مستقیم ډول له حجرو یا نسجونو څخه ټول RNA استخراج کړي.دا مواد لري لکه فینول او ګیانیډین اسوتیوسیانیټ، کوم چې کولی شي په چټکۍ سره حجرې ګډوډ کړي او د حجرو لخوا خوشې شوي نیوکلیزونه منع کړي.

(په هرصورت، ګیانیډین اسوتیوسیانیټ د لابراتوار څیړونکو روغتیا لپاره خطرناک دی.)

RNasin:

اسید ګلیکوپروټین د موږک ځیګر یا د انسان بلاستوډرم څخه استخراج شوی.Rnasin د RNase غیر رقابتي مخنیوی کونکی دی، کوم چې کولی شي د غیر فعالولو لپاره مختلف RNases سره وصل شي.

(نور جزیات:https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hلوړ حرارت:

د تودوخې لوړه درجه هم د پروټین د تخریب یوه عامه وسیله ده.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC یو پیاوړی مګر نامکمل RNase مخنیوی کونکی دی، کوم چې کولی شي د RNase فعالیت مخه ونیسي د RNase فعال ګروپ امینو اسید امیدازول حلقې سره یوځای کولو سره د پروټینونو د مینځلو لپاره.

د وینادیل ریبونیوکلیوسایډ کمپلیکس:

یو کمپلیکس چې د وینډیم آکسایډ ایونونو او نیوکلیوسایډونو لخوا رامینځته شوی ، کوم چې د لیږد مادې په توګه RNase پورې تړلی دی ، کوم چې کولی شي نږدې په بشپړ ډول د RNase فعالیت منع کړي.

نور:

SDS، urea، diatomaceous Earth او داسې نور هم په RNase باندې یو مشخص مخنیوی اغیز لري.

د کارپوهانو بیاکتنې

لی یوجی لوی تخنیکر

د لابراتوار څانګې رییس ، د جیوژو روغتون ، دونګ فانګ روغتون د تونګجي پوهنتون پورې تړلی

د Exogenous RNase د بایوډیګریشن مخنیوي لپاره ، ماسکونه ، دستکشې او خولۍ باید د RNA استخراج پروسې په جریان کې په مکرر ډول اغوستل شي او بدل شي.د شیشې ټول سامانونه باید د 200 درجو په تودوخه کې د 2 ساعتونو څخه زیات د وچولو تنور کې پخه شي.هغه مواد چې د پخولو لپاره کارول کیږي، لکه پلاستيک، باید د DEPC اوبو سره درملنه وشي، او بیا د مینځلو اوبو سره مینځل شي.هغه ریجنټ یا وسایل چې د RNA استخراج، ساتنې او پیژندنې لپاره کارول کیږي باید RNA ته وقف شي، او د RNA عملیاتي ساحه باید جوړه شي.

حوالې:

Smith-Vaughan HC، Binks MJ، Beissbarth J، et al.په ناسوفرینکس کې باکتریا او ویروسونه سمدلاسه مخکې له دې چې د استرالیا په اصلي ماشومانو کې د شدید تنفسي انتاناتو پیل شي [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] د چین د مخنیوي درملو اتحادیې د روغتون انفیکشن کنټرول څانګه.د کلینیکي مایکروبیل نمونو راټولولو او تفتیش لپاره لارښوونې [J].د روغتون انفیکشن چینایي ژورنال، 2018(20): 3192-3200.

[3] "کلینیکل ټیسټ لس زره ولې د مالیکول بیولوژي ازموینې حجم"