د PCR ریجنټونو په لومړیو مرحلو کې د پرائمرونو او پروبونو فعالیت تایید کول او د مناسب عکس العمل شرایطو ټاکل د رسمي تجربو د ښه پرمختګ ډاډ ترلاسه کولو لپاره لومړني شرایط دي.
نو موږ څنګه اړتیا لرو چې په لومړي مرحله کې د پریمر تحقیقات تایید کړو؟
اصلي شاخصونه اساسات دي، د پراخولو منحل، د CT ارزښت، د لوړولو وړتیا، د ټیټ غلظت نمونې کشف، CV، او نور.
بیس لائن
بیس لاین د PCR امپلیفیکیشن وکر کې افقی کرښه ده.د PCR امپلیفیکیشن غبرګون په لومړیو څو دورو کې، د فلوروسینس سیګنال ډیر بدلون نه کوي او مستقیم کرښه جوړوي.دا مستقیم کرښه اساسی کرښه ده.
کله چې د PCR پرائمر پروبونو سکرین کول، پام وکړئ چې آیا بیس لاین کچه ده.د پریمر پروب غلظت پاکوالی به په بیس لاین اغیزه وکړي ، لکه د بیس لاین د لوړیدو یا سقوط لامل کیږي.اساس لاین هم یو ډیر دقیق شاخص دی.
امپلیفیکیشن وکر
بل هوښیار شاخص د امپلیفیکیشن وکر شکل دی.دا غوره ده چې د S شکل لرونکی وکر ولرئ ترڅو د ثانوي امپلیفیکیشن یا نورو غیر معمولي امپلیفیکیشن منحني مخنیوی وشي.
د Ct ارزښت
د سایکلونو شمیر چې د انفلیکشن نقطې سره مطابقت لري د بیس لاین څخه د کفایتي ودې ته د Ct ارزښت دی.
د ورته نمونې لپاره، مختلف پریمر پروبونه د مختلف امپلیفیکیشن منحني پایله لري، او د اړونده Ct ارزښت به د لوړولو موثریت او مداخلې درجې لخوا اغیزمن شي.په تیوري کې، د پریمر تحقیقاتو د Ct ارزښت چې موږ یې غوره کوو، ښه به وي.
د لوړولو موثریت
د PCR امپلیفیکیشن موثریت ارزولو لپاره یو له خورا معتبر او مستحکم میتودونو څخه معیاري وکر دی ، کوم چې د څیړونکو لخوا هم په پراخه کچه پیژندل شوی.په دې طریقه کې د یو لړ نمونو جوړول شامل دي ترڅو د هدف ټیمپلیټونو نسبتا شمیر کنټرول کړي.دا نمونې معمولا د متمرکز سټاک محلولونو سیریل ډیلیوشنونو لخوا رامینځته کیږي ، چې ترټولو عام کارول کیږي 10-fold dilutions.د منحل شویو نمونو لړۍ کارول، د معیاري qPCR پروګرام په کارولو سره د Cq ارزښت ترلاسه کولو لپاره پراخول، او په پای کې د هرې نمونې د غلظت او اړونده Cq ارزښت سره سم یو معیاري وکر د خطي مساواتو ترلاسه کولو لپاره Cq= -klgX0+b، او د لوړولو موثریت E=10(-1 /k1)-.کله چې د کمیتي تحلیل لپاره qPCR کارول کیږي، د پراخولو موثریت باید د 90%-110٪ (3.6>k>3.1) په حد کې وي.
د ټیټ غلظت نمونې کشف
کله چې د نمونې غلظت ټیټ وي، د مختلف پریمر پروبونو د کشف نرخ مختلف وي.موږ د نقل کولو لپاره 20 ټیټ غلظت نمونې غوره کوو، او د پریمر تحقیقات سیسټم د لوړ کشف نرخ سره غوره دی.
د تغیر اندازه (CV)
د 10 نقل نمونې د نیوکلیک اسید امپلیفیکیشن کشف لپاره د ریجنټ لاین معیار سره سم د مختلف پریمر پروبونو سره کشف کیدی شي.
کمیتي ریجنټونه:
دقت
په یوه بسته کې دقت باید پوره شي: د ټیسټ غلظت د لوګاریتمیک ارزښت د تغیر کوفییفنټ (CV،٪) ≤5٪ دی.کله چې د نمونې غلظت ټیټ وي، د کشف غلظت د لوګاریتم د تغیر مجموعه (CV،٪) ≤10% ده
کیفیت لرونکي ریجنټونه:
دقت
په یوه بسته کې دقت باید پوره شي:
(1) د Ct ارزښت (CV،٪) ≤5٪ د تغیر اندازه
ورته نمونه د 10 ځله په موازي ډول ازمول کیږي، او د ازموینې پایلې باید یو شان وي
د پوسټ وخت: سپتمبر 18-2021