• فیسبوک
  • لینکډین
  • یوټیوب

زه باور لرم چې هرڅوک به د PCR عکس العمل کولو په وخت کې تل له ورته یا ورته ستونزو سره مخ شي ، مګر ډیری یې په دوه اصلي ستونزو طبقه بندي کیدی شي:

د جین ټیمپلیټ ډیر لږ پراخول (تعدیل)؛
ډیر زیات غیر هدفي جین پراخول.
د اضافه کولو کارول د دې ستونزو د حل لپاره یو له عامو ستراتیژیو څخه دی.معمولا د اضافه کولو رول دوه اړخونه لري:
ثانوي جوړښتد جینونو (ثانوي جوړښت)؛
غیر مشخص پریمینګ کم کړئ.
نن ورځ ، مدیر به تاسو ته د PCR عکس العملونو او د دوی دندو کې عام اضافه کونکي په لنډ ډول معرفي کړي.
Additives چې ثانوي جوړښت کموي
سلفوکسایډ(DMSO)
د جین نمونېد لوړ GC مینځپانګې سرهپه هرصورت، DMSO هم د Taq پولیمریز فعالیت خورا کموي.له همدې امله، هرڅوک باید د ټیمپلیټ لاسرسي او د پولیمیریز فعالیت توازن کړي.مدیر وړاندیز کوي چې تاسو کولی شئ د DSMO مختلف غلظت هڅه وکړئ ، لکه له 2٪ څخه تر 10٪ پورې ، ترڅو هغه غلظت ومومئ چې ستاسو تجربې سره مناسب وي.
غیر ionic صابون
غیر ionic صابون، لکه 0.1-1٪ Triton X-100، Tween 20 یا NP-40، معمولا د DNA ثانوي جوړښت کموي.که څه هم دا کولی شي د ټیمپلیټ جین پراخوالی زیات کړي، دا به د غیر مشخص لوړولو ستونزې هم رامینځته کړي.نو، دا اضافه کونکي پرته له کثافاتو د ټیټ حاصل PCR عکس العملونو لپاره ښه کار کوي ، مګر د نسبتا ناپاک PRC عکس العملونو لپاره دومره ښه ندي.د غیر ایونیک صابون بله ګټه د SDS ککړتیا کمول دي.معمولا د DNA استخراج پروسې په جریان کې ، SDS به د PCR مرحلې ته راوړل شي ، کوم چې د پولیمیریز فعالیت خورا منع کوي.نو ځکه، په عکس العمل کې د 0.5٪ Tween-20 یا Tween-40 اضافه کول د SDS منفي اغیزې بې طرفه کولی شي.
بیټین_
بیټین کولی شي د ثانوي جوړښت جوړښت کمولو سره د DNA امپلیفیکیشن ته وده ورکړي او عموما د سوداګریز PCR کټونو لپاره "اسرار" اضافه ده.که تاسو غواړئ چې بیټین وکاروئ، تاسو باید بیټین یا بیټین مونو هایډریټ (بیټین یا بیټین مونو هایډریټ) واچوئ، مګر د بیټین هایدروکلورایډ (بیټین ایچ سی ایل) نه، د 1-1.7M وروستی غلظت سره تنظیم کړئ.بیټین کولی شي د ځانګړتیاوو په ښه کولو کې هم مرسته وکړي ځکه چې دا د DNA خټکي / DNA ډینټوریشن اساس جوړه جوړښت انحصار له مینځه وړي.
اضافه کول د غیر مشخص پریمینګ کمولو لپاره
فارمامیډ
فارمامایډ یو عام استعمال شوی عضوي PCR اضافه کونکی دی.دا کولی شي په DNA کې د لوی نالی او کوچني نالی سره یوځای شي، په دې توګه د ماسټر DNA ډبل هیلکس ثبات کموي او د DNA د خټکي تودوخې کموي.د PCR تجربو کې کارول شوي فارماایډ غلظت معمولا 1٪ -5٪ دی.
Tetramethylامونیم کلورایډ( TMAC)
Tetramethylammonium کلورایډ کولی شي د هایبرډیزیشن ځانګړتیا (د هایبرډیزیشن ځانګړتیا) زیاته کړي او د DNA د تودوخې درجه لوړه کړي.په دې توګه، TMAC کولی شي غیر مشخص ابتدايي لیرې کړي او د DNA او RNA غلط تړل کم کړي.که تاسو کاروئتخریب شوي پریمرد PCR په غبرګون کې، په یاد ولرئ چې TMAC اضافه کړئ، کوم چې معمولا د 15-100mM په غلظت کې کارول کیږي.
نور عام اضافه کول
د پورته ذکر شوي اضافه کونکو دوه کټګوریو سربیره ، د PCR عکس العملونو کې ډیری عام اضافه کونکي شتون لري ، که څه هم دوی مختلف دندې لري ، دوی خورا مهم دي.
مګنیزیم ایون
مګنیزیم آئن د پولیمیریز یو لازمي کوفیکټر (کوفاکټر) دی ، یعني د مګنیزیم آئن پرته ، پولیمیریز غیر فعال دی.په هرصورت، ډیر میګنیشیم آئن کولی شي د پولیمیریز موثریت هم اغیزمن کړي.د هر PCR عکس العمل کې د مګنیزیم آئن غلظت به توپیر ولري.د چیلیټینګ اجنټان (لکه EDTA یا citrate)، د dNTPs او پروټین غلظت ټول د مګنیزیم آئنونو غلظت اغیزه کوي.نو، که تاسو د خپل PCR تجربې سره ستونزې لرئ، تاسو کولی شئ د مختلف مګنیزیم آئن غلظت بدلولو هڅه وکړئ، د بیلګې په توګه، له 1.0 څخه تر 4.0mm پورې، په منځ کې د 0.5-1mM وقفې سره.
دا د یادولو وړ ده چې د کنګل کولو څو دورې کولی شي د مګنیزیم کلورایډ محلول غلظت سټراټیفیکیشن لامل شي.له همدې امله، تاسو باید د هر کارونې دمخه په بشپړه توګه منحل کړئ، او د کارولو دمخه یې ښه مخلوط کړئ.
د غوایانو سیرم البومین(بووین البومین، BSA)
د مالیکولر کیمیا په تجربو کې، د بوواین سیرم البومین یو ډیر عام اضافه دی، په ځانګړې توګه د انزایم هضم او PCR په تجربو کې.د PCR عکس العملونو کې، BSA د ککړتیاو لکه فینولیک مرکباتو په کمولو کې مرسته کوي.او دا هم ویل کیږي چې دا کولی شي د ټیسټ ټیوب دیوال ته د عکس العملونو چپکولو کم کړي.د PCR په عکس العمل کې، معمولا د BSA اضافه غلظت کولی شي 0.8 mg/ml ته ورسیږي.
 
اړوند توليدات:
د PCR هیرو(د رنګ سره)
د PCR هیرو


د پوسټ وخت: فبروري 10-2023