لیډ

اوږد غیر کوډ RNA، lncRNA یو غیر کوډ کولو RNA دی چې اوږدوالی یې له 200 نیوکلیوټایډونو څخه ډیر دی، معمولا د 200-100000 nt ترمنځ.lncRNA په ایپیګینیټیک، ټرانسکرپشن او د لیږد وروسته وروسته د جین بیان تنظیموي، او د X کروموزوم خاموش کولو، د جینوم امپرینټ کولو او د کروماتین ترمیم، د لیږد فعالولو، د لیږد مداخله، اټومي ټرانسپورټ، د حجرو دورې مقررات، د حجرو توپیر او نور اغیزې تنظیموي (ډیری مهمې اغیزې تنظیموي او د کمپوزیشن پروسې تنظیموي) د انساني ناروغیو پیښې، پراختیا او مخنیوي سره نږدې تړاو لري، او دا مهال د بایو میډیسن په ډګر کې یو له ګرمو ځایونو څخه دی.

01  د LncRNA ډولونه او ځانګړتیاوې

lncRNA د خپل جوړښت د مختلفو سرچینو له مخې په ډیری ډولونو ویشل شوی، لکه څنګه چې پورته انځور کې ښودل شوي.لاندې ځانګړتیاوې لري:

1. lncRNAs معمولا اوږد وي، د متحرک بیان او د توپیر په وخت کې د جلا کولو مختلف میتودونو سره
2. د کوډ کولو جینونو سره پرتله کول، lncRNA معمولا د بیان ټیټه کچه لري
3. ډیری lncRNAs د نسجونو د توپیر او پراختیا په پروسه کې څرګند لنډمهاله او ځایي څرګندتیا لري.
4. په تومورونو او نورو ناروغیو کې د ځانګړتیاوو څرګندونه شتون لري
5. د lncRNA فرعي سیلولر موقعیتونه متنوع دي
6. ترتیب په محافظت کې ټیټ دی، مګر فعالیت یو ټاکلی درجې محافظت لري، او نور.

02 د LncRNA ریورس لیږد په اړه ډیری پوښتل شوي پوښتنې

په حجرو کې د lncRNA د ټیټ محتوياتو له امله، اوږده اوږدوالی او د لوړې کچې جوړښت، دا ډول RNA اکثرا پیچلي جوړښتونه لري لکه د سټیم لوپس یا ویښتان، او RT-qPCR د ناکامي بیرته لیږد یا ټیټ موثریت له ستونزو سره مخ کیږي.

03 LncRNA ریورس لیږد حل

په مرکزي قاعده کې، د RNA ویروسونو پروسه د خپل ریورس ټرانسکریپټیس په کارولو سره د DNA ترکیب کولو لپاره د RNA په توګه د ټیمپلیټ په توګه کارول کیږي.په ویټرو کې د cDNA ټیمپلیټ ترکیب کولو لپاره د RNA ویروس ریورس ټرانسکریپټ کارولو پروسې ته ریورس ټرانسکرپشن ویل کیږي.اصلي عناصر چې د ریورس ټرانسکرپشن سیسټم کې شامل دي: RNA ټیمپلیټ، ریورس ټرانسکریټیس، پریمر او نور اجزا.

1.RNA ټیمپلیټ

د RNA ټیمپلیټ اغیزه په ریورس لیږد باندې د هغې په جوړښت، پاکوالي او بشپړتیا کې منعکس کیږي.هرڅومره چې د استخراج شوي RNA پاکوالي او بشپړتیا لوړه وي ، هومره د ریورس لیږد موثریت لوړ وي او د راتلونکي کمیتي پایلې خورا دقیقې وي.هغه RNA چې په عام ډول کارول کیږي د RNA استخراج ریجنټونو لخوا پاک شوي اکثرا د الکول او ګیانډین مالګې پاتې شونه لري، کوم چې په ډیری ریورس ټرانسکریټیس باندې قوي مخنیوی اغیزه لري.

2. ریورس ټرانسکریپټیس

ریورس ټرانسکریټیس په ټول ریورس لیږد سیسټم کې کلیدي نفوذ لري.په ډیرو لابراتوارونو کې کارول شوي د ریورس ټرانسکریپټیس لپاره مناسب تودوخه عموما 42 سانتي ګراد ده.په حقیقت کې، د لوړې کچې RNA جوړښت پرانیستل لوړې تودوخې ته اړتیا لري، او د ریورس ټرانسکریټیس اړتیاوې لوړې دي.

3.پریمر

د ریورس ټرانسکرپشن پرائمرونو کې د جین ځانګړي پرائمرونه ، تصادفي پریمرونه او د اولیګو dT پریمر شامل دي.ډیری lncRNAs د پولیA tails نلري، او دا مهمه ده چې د Oligo dT سره تصادفي پرائمر په سمه توګه سره سمون ومومي.

4. نورې برخې

د دې حقیقت په پام کې نیولو سره چې RNA په ځانګړي ډول تخریب کول اسانه دي ، د ریورس لیږد سیسټم کې د اجزاو معرفي کول کم کیدی شي ، کوم چې کولی شي په مؤثره توګه د RNase ننوتلو مخه ونیسي او د ریورس لیږد اسانه پرمختګ ډاډمن کړي.

Fاورجیند RNA ټیمپلیټ څخه ترلاسه کیږي، د qPCR ته نقل کول بیرته راګرځوي

په هراړخیز ډول ستاسو د lncRNA کشف خوندي کړئ

د څارویو ټولټال RNA Iحلکټ (د gDNA لرې کولو کالم سره)

د حجرو ټولټال RNA Iحلکټ (د gDNA لرې کولو کالم سره)

Lnc-RT HeroTM I (د gDNase سره) (د lncRNA څخه د لومړي سټینډ cDNA ترکیب لپاره سوپر پریمکس)

د ریښتیني وخت PCR EasyTM-SYBR شنه I

Aګټې ofد RNA استخراج:

کټ د دریم نسل RNA استخراج ټیکنالوژي کاروي، د DNase کارولو ته اړتیا نشته.

11 دقیقې د 96، 24، 12، او 6 ښه پلیټ کلتور شوي حجرو څخه، د GDNA څخه پاک، لوړ پاکوالی، د لوړ کیفیت ټول RNA د لوړ موثریت استخراج.

د lncRNA ریورس لیږد ګټې:

د ریورس لیږد سیسټم په ځانګړي ډول د LncRNA لپاره رامینځته شوی ترڅو ژر تر ژره د جینومیک DNA ککړتیا لرې کړي.

د ریورس ټرانسکرپشن سیسټم لوړ حرارتي ثبات لري او لاهم په 50 ° C کې د ریورس لیږد ښه فعالیت لري.

د لوړ GC مینځپانګې او پیچلي ثانوي جوړښت سره ټیمپلیټونه د لوړ موثریت سره بدل کیدی شي.

ګټېof qPCR:

هاټ سټارټ فارجین تاق پولیمریز د لوړ لوړولو موثریت ، د لوړ لوړولو حساسیت ، او د لوړ لوړولو ځانګړتیا لري

مطلوب اصلی PCR ایزی مکس د SYBR ګرین I رامینځته کوي لوړ کشف حساسیت لري ، او د دې د فلوروسینس شدت د ورته محصولاتو په پرتله 3-5 ځله دی ، کوم چې کولی شي د مختلف ډوله فلوروسینس کمیتي تجربو اړتیاوې پوره کړي.