د ریښتیني وخت PCR ، چې د کمیتي PCR یا qPCR په نوم هم پیژندل کیږي ، د PCR امپلیفیکیشن محصولاتو ریښتیني وخت نظارت او تحلیل لپاره میتود دی.
ځکه چې کمیتي PCR د ساده عملیاتو ګټې لري ، ګړندي او اسانه ، لوړ حساسیت ، ښه تکرار وړتیا ، او د ککړتیا ټیټ نرخ ، دا په پراخه کچه په طبي ازموینې ، د درملو مؤثریت ارزونې ، د جین څرګندولو څیړنه ، ټرانسجینک څیړنه ، جین کشف ، د ناروغۍ کشف ، څارویو او نبات کشف کې کارول کیږي.، د خوړو ازموینه او نورې برخې.
له همدې امله، که تاسو د ژوند په علومو کې په بنسټیزو څیړنو کې بوخت یاست، یا د درمل جوړولو شرکتونو، د څارویو پالنې شرکتونو، خوراکي شرکتونو، یا حتی د ننوتلو څخه د وتلو تفتیش او قرنطین بیورو، د چاپیریال د څارنې څانګې، روغتونونو او نورو واحدونو کارمندان، تاسو به لږ یا لږ ښکاره شئ یا تاسو اړتیا لرئ چې د PCR مقدار ماسټر کولو په اړه پوهه ولرئ.

د ریښتیني وخت PCR اصول

ریښتیني وخت PCR هغه میتود دی چې په کې د فلوروسینټ مادې د PCR عکس العمل سیسټم کې اضافه کیږي ، او د PCR عکس العمل په پروسه کې د فلوروسینټ سیګنال شدت په ریښتیني وخت کې د کمیتي PCR وسیلې لخوا څارل کیږي ، او په پای کې تجربې ډاټا تحلیل او پروسس کیږي.

【امپلیفیکیشن وکر】هغه وکر دی چې د PCR متحرک پروسه بیانوي.د PCR امپلیفیکیشن وکر په حقیقت کې یو معیاري مصرفي وکر نه دی ، مګر یو سیګمایډ وکر دی.

[د امپلیفیکیشن وکر پلیټ فارم مرحله]د PCR سایکلونو د شمیر په زیاتوالي سره، د DNA پولیمیریز غیر فعال کیدل، د dNTPs او پریمرونو کمیدل، او د تولیداتو پیروفاسفیټ لخوا د تعامل له لارې د ترکیب غبرګون منع کول، او نور، PCR تل په چټکۍ سره نه پراخیږي.، او په نهایت کې به یو پلو ته ننوځي.

[د امپلیفیکیشن منحني پراخې ودې سیمه]که څه هم د پلیټو مرحله خورا توپیر لري، د امپلیفیکیشن وکر د پراختیایي ودې سیمې په یوه ځانګړې سیمه کې، د تکرار وړتیا خورا ښه ده، کوم چې د PCR د کمیتي تحلیل لپاره خورا مهم دی.

[د حد ارزښت او د Ct ارزښت]موږ د فلوروسینس کشف محدودیت ارزښت د امپلیفیکیشن وکر د اضطراري ودې ساحې کې په مناسب موقعیت کې ټاکلی ، د بیلګې په توګه د حد ارزښت (د حد).د حد ارزښت او د امپلیفیکیشن منحنی مقطع د Ct ارزښت دی، دا د Ct ارزښت د دورې شمیر ته اشاره کوي (د حد سایکل) کله چې د حد ارزښت ته ورسیږي.

لاندې ګراف په واضح ډول د حد د کرښې او امپلیفیکیشن وکر، حد او Ct ارزښت ترمنځ اړیکه ښیې.

【څنګه اندازه کول؟】

دا د ریاضياتي تیورۍ لخوا ثابت شوی چې د Ct ارزښت د ابتدايي ټیمپلیټونو د شمیر لوګاریتم سره متقابل خطي اړیکه لري.د ریښتیني وخت PCR په ریښتیني وخت کې د PCR امپلیفیکیشن محصولات څاري او د اضطراري امپلیفیکیشن مرحلې په جریان کې یې مقدار کوي.

د PCR د هرې دورې لپاره، DNA په چټکۍ سره 2 ځله زیات شوی، او ډیر ژر یو سطح ته ورسید.

فرض کړئ چې د پیل شوي DNA اندازه A ده₀ ، د n دورې وروسته ، د DNA محصول تیوریکي مقدار په لاندې ډول څرګند کیدی شي:

A _n =A ₀ ×2ⁿ

بیا، هرڅومره چې د DNA ابتدايي مقدار A 0 وي، څومره ژر چې د پراخ شوي محصول اندازه د کشف ارزښت An ته ورسیږي، او کله چې An ته ورسیږي د Ct ارزښت دی.دا چې د DNA لومړنۍ اندازه د A 0 ډیره وي، په هماغه اندازه د امپلیفیکیشن منحني لوړوالی ډیریږي، او په ورته ډول د n دورې اړین شمیر کوچنی وي.

موږ د پیژندل شوي غلظت معیار تدریجي کمول ترسره کوو او دا د ریښتیني وخت PCR لپاره د ټیمپلیټ په توګه کاروو ، او د ډی این اے مقدار له ډیر څخه لږ پیل کولو ترتیب کې به د امپلیفیکیشن منحني لړۍ په مساوي وقفو کې ترلاسه شي.د Ct ارزښت او د پیل شوي ټیمپلیټونو د شمیر لوګاریتم تر مینځ د خطي اړیکې له مخې ، a[معیاري وکر] رامینځته کیدی شي.

د نمونې د Ct ارزښت د نامعلوم غلظت سره په معیاري وکر کې ځای په ځای کولو سره، د نمونې لومړنۍ نمونې اندازه د نامعلوم غلظت سره ترلاسه کیدی شي، کوم چې د ریښتیني وخت PCR کمیتي اصول دی.

د ریښتیني وخت PCR کشف کولو میتود

د ریښتیني وخت PCR د عکس العمل سیسټم کې د فلوروسینس شدت کشف کولو سره د PCR امپلیفیکیشن محصولات کشف کوي.

د فلوروسینټ رنګ د سرایت کولو میتود اصول】

فلوروسینټ رنګونهلکه د TB Green®، په غیر مشخص ډول د PCR سیسټمونو کې دوه اړخیزه DNA سره تړل کیدی شي او د پابندۍ په وخت کې فلوروسیس.

د عکس العمل سیسټم کې د فلوروسینس شدت د PCR دورې د زیاتوالي سره په چټکۍ سره زیات شوی.د فلوروسینس د شدت په موندلو سره، د عکس العمل سیسټم کې د DNA امپلیفیکیشن اندازه په ریښتیني وخت کې وڅیړل شي، او بیا په نمونه کې د پیل شوي ټیمپلیټ اندازه په برعکس اټکل کیدی شي.

【د فلوروسینټ تحقیقاتو میتود اصول】

فلوروسینټ تحقیقاتد نیوکلیک اسید سلسله ده چې په 5′ پای کې د فلوروسینټ ګروپ سره او په 3′ پای کې د شنډولو ګروپ لري، کوم چې کولی شي په ځانګړې توګه د ټیمپلیټ سره وصل شي.کله چې پروب ثابته وي، د فلوروفور لخوا خارج شوی فلوروسینس د شنډولو ګروپ لخوا قطب کیږي او فلوروسیس نشي کولی.کله چې پروب تخریب شي، د فلوروسینټ ماده به جلا شي او فلوروسینټ خارج کړي.

د فلوروسینټ تحقیقات د PCR عکس العمل حل کې اضافه کیږي.د انیل کولو پروسې په جریان کې ، د فلوروسینټ تحقیقات به د ټیمپلیټ ځانګړي موقعیت سره وصل شي.د تمدید پروسې په جریان کې، د PCR انزایم 5′→ 3′ exonuclease فعالیت کولی شي د فلوروسینټ تحقیقات د سانچ سره هایبرډ شوي تحلیل کړي، او د فلوروسینټ ماده د فلوروسینټ خارجولو لپاره جلا کیږي.د عکس العمل سیسټم کې د تحقیقاتو د فلوروسینس شدت موندلو سره، د PCR محصول د لوړولو اندازه څارلو هدف ترلاسه کیدی شي.

【د فلوروسینس کشف کولو میتود انتخاب】

که دا د لوړې هومولوژي سره د ترتیبونو توپیر کولو لپاره کارول کیږي او د ملټي پلیکس PCR کشف ترسره کوي لکه د SNP ټایپینګ تحلیل ، د فلوروسینټ تحقیقاتو میتود نه بدلیدونکی دی.
د نورو ریښتیني وخت PCR تجربو لپاره ، یو ساده ، اسانه او ټیټ لګښت د فلوروسینټ چیمیرا میتود کارول کیدی شي.

تحقیقات قوي ځانګړتیا، د ملټي پلیکس PCR وړتیا

نیمګړتیا

د لوړولو لپاره د لوړ ځانګړتیا اړتیاوې؛

ملټي پلیکس PCR نشي ترسره کیدی د ځانګړو تحقیقاتو ډیزاین کولو ته اړتیا لري، لوړ لګښت؛

ځینې ​​​​وختونه د تحقیقاتو ډیزاین ستونزمن وي

اړوند توليدات: