PCR د نیوکلیک اسید امپلیفیکیشن ټیکنالوژي ترټولو پراخه کارول کیږي او د حساسیت او ځانګړتیا له امله په پراخه کچه کارول کیږي.په هرصورت، PCR مکرر حرارتي تخریب ته اړتیا لري او نشي کولی په وسایلو او تجهیزاتو تکیه کولو محدودیتونو څخه خلاص شي ، کوم چې د کلینیکي ساحې ازموینې کې د دې غوښتنلیک محدودوي.

د 1990 لسیزې له پیل راهیسې، ډیری لابراتوارونو د دوامداره تودوخې لوړولو ټیکنالوژۍ رامینځته کول پیل کړي چې د تودوخې تخریب ته اړتیا نلري.اوس دوی د لوپ منځګړیتوب isothermal امپلیفیکیشن ټیکنالوژي ، د سټینډ بدلیدونکي isothermal امپلیفیکیشن ټیکنالوژي ، د رولینګ حلقه isothermal امپلیفیکیشن ټیکنالوژي ، او د نیوکلیک اسید تسلسل انحصار رامینځته کړی.Isothermal amplification ټیکنالوژي او نور ټیکنالوژي. 

Loop - منځګړیتوب isothermal amplification

د امپلیفیکیشن اصول د دې حقیقت پراساس دي چې DNA د 65 درجې سانتي ګراد په متحرک انډول حالت کې دی.کله چې کوم پرائمر اساس جوړه شي او د ډبل سټنډ شوي DNA تکمیلي برخې ته غزول شي ، نو بل سټنډ به جلا شي او یو واحد سټنډ شي.

په دې تودوخې کې، DNA 4 ځانګړي پرائمرونه کاروي ترڅو د سټینډ بې ځایه کیدونکي DNA پولیمیریز باندې تکیه وکړي ترڅو د سټینډ - بې ځایه کیدو DNA پخپله په دوامداره توګه حرکت وکړي.

لومړی د هدف په جین کې 6 مشخصې سیمې F3, F2, F1, B1, B2, B3 وټاکئ او بیا د دې 6 ځانګړو سیمو پراساس 4 پرائمر ډیزاین کړئ (لکه څنګه چې لاندې عکس کې ښودل شوي):

مخکښ داخلي پریمر (FIP) د F1c او F2 څخه جوړ شوی دی.

شاته داخلي پریمر (BIP) د B1c او B2 څخه جوړ شوی، او TTTT په مینځ کې د سپیسر په توګه کارول کیږي.

بهرنۍ پرائمرونه F3 او B3 په ترتیب سره په نښه شوي جین کې د F3 او B3 سیمو څخه جوړ شوي دي.

د LAMP غبرګون سیسټم کې، د داخلي پریمر غلظت د بهرنی پریمر څو چنده دی.داخلي پریمر لومړی د ټیمپلیټ سټینډ سره یوځای کیږي ترڅو د بشپړونکي سټینډ ترکیب کړي ترڅو د DNA ډبل سټینډ رامینځته کړي.وروسته، بهرنی پریمر د ټیمپلیټ سټینډ سره یوځای کیږي ترڅو د DNA ډبل سټینډ جوړ کړي.د BstDNA پولیمیریز د عمل لاندې، د داخلي پریمر لخوا ترکیب شوي تکمیلي سټنډ خوشې کیږي.د یو لړ عکس العملونو وروسته، بشپړونکي سټنډ په پای کې د ډمبیل جوړښت سره یو واحد DNA سټینډ جوړوي.

د ډمبیل جوړښت DNA واحد سټنډ پخپله د یوې نمونې په توګه کارول کیږي ترڅو په دوامداره توګه د خلاصې پای سره د انتقالي سټیم لوپ جوړښت DNA رامینځته کړي.داخلي او بهرنۍ پرائمرونه د انتقالي ډډ لوپ جوړښت DNA ته لارښوونه کوي چې په دوامداره توګه د سټیم بې ځایه کیدو او توسیع عکس العملونو څخه تیریږي، او په پای کې د مختلفو اوږدوالی سره ډیری سټیم لوپ جوړښتونه جوړوي.د DNA مخلوط.

د لوپ منځګړیتوب isothermal amplification ګټې او زیانونه

د LAMP ګټې:

(1) د لوړ لوړولو موثریت، کوم چې کولی شي په مؤثره توګه د هدف جین 1-10 نقلونه په 1h کې پراخ کړي، او د پراخولو موثریت د عادي PCR په پرتله 10-100 ځله دی.

(2) د عکس العمل وخت لنډ دی، ځانګړتیا پیاوړې ده، او کوم ځانګړي تجهیزاتو ته اړتیا نشته.

د LAMP نیمګړتیاوې:

(1) د پریمرونو اړتیاوې په ځانګړې توګه لوړې دي.

(2) پراخ شوی محصول د کلونینګ او ترتیب کولو لپاره نشي کارول کیدی، مګر یوازې د قضاوت لپاره کارول کیدی شي.

(3) د دې قوي حساسیت له امله ، د ایروسول رامینځته کول اسانه دي ، د غلط مثبتو لامل کیږي او د ازموینې پایلې اغیزه کوي.

Sد ټرانډ بې ځایه کیدنه

د سټینډ بې ځایه کیدو امپلیفیکیشن (SDA) د انزیماتیک عکس العمل پراساس د وټرو اسوترمل DNA امپلیفیکیشن تخنیک دی چې لومړی په 1992 کې د امریکایی پوه واکر لخوا وړاندیز شوی.

د SDA بنسټیز سیسټم کې د محدودیت Endonuclease، د DNA پولیمیریز د سټینډ بې ځایه کیدو فعالیت، دوه جوړه پریمر، dNTPs، او کلسیم او مګنیزیم آئنونه او بفر سیسټمونه شامل دي.

د سټنډ بې ځایه کیدو امپلیفیکیشن اصول د هدف DNA په دواړو سرونو کې د کیمیاوي تعدیل شوي محدودیت endonuclease پیژندنې ترتیب پراساس دی.Endonuclease په خپل پیژندنې ځای کې د strand DNA کې تشه خلاصوي، او د DNA پولیمیریز د 3′ پای ته غځوي او د راتلونکي DNA سټنډ ځای نیسي.

د DNA بدل شوي واحد سټینډونه د پرائمر سره یوځای کیدی شي او د DNA پولیمیریز لخوا په دوه ګوني سټنډونو کې غزیدلی شي.دا پروسه په دوامداره توګه تکرار کیږي، ترڅو د هدف ترتیب په اغیزمنه توګه پراخ شي.

د سټینډ بې ځایه کیدو امپلیفیکیشن ټیکنالوژۍ ګټې او زیانونه

د SDA ګټې:

د لوړولو موثریت لوړ دی ، د عکس العمل وخت لنډ دی ، ځانګړتیا قوي ده ، او کوم ځانګړي تجهیزاتو ته اړتیا نشته.

د SDA نیمګړتیاوې:

محصولات یونیفورم نه دي، او ځینې یو واحد او دوه ګونی محصوالت تل د SDA دورې کې تولید کیږي، او پایښت به حتمي واقع شي کله چې د الیکٹروفورسس لخوا کشف شي.

Rد حلقې پراخول

د رولینګ حلقه امپلیفیکیشن (RCA) وړاندیز شوی چې د حلقې رول کولو په واسطه د رنځجنیک ارګانیزمونو څخه د DNA کاپي کولو میتود په رسم کولو سره وړاندیز شوی.دا په ثابته تودوخه کې د یوې نمونې په توګه د واحد ډنډ شوي سرکلر DNA کارولو ته اشاره کوي، او د ځانګړي DNA پولیمیریز (لکه Phi29) د رولینګ حلقې DNA ترکیب د عمل الندې د هدف جین پراخوالی ترلاسه کولو لپاره.

RCA په خطي امپلیفیکیشن او exponential amplification ویشل کیدی شي.د خطي RCA موثریت کولی شي 10 ته ورسیږي⁵وختونه، او د مصرفي RCA موثریت 10 ته رسیدلی شي⁹وختونه

ساده توپیر، لکه څنګه چې په لاندې انځور کې ښودل شوي، خطي امپلیفیکیشن a یوازې 1 پرائمر کاروي، د exponential amplification b 2 primers لري.

خطي RCA د واحد پریمر RCA په نوم هم یادیږي.یو پریمر د سرکلر DNA سره تړلی دی او د DNA پولیمریز د عمل په واسطه غځول کیږي.محصول یو خطي واحد سټینډ دی چې د ډیری تکراري ترتیبونو لوی شمیر سره د یو واحد لوپ اوږدوالی زرګونه ځله.

څرنګه چې د خطي RCA محصول تل د پیل شوي پرائمر سره وصل وي ، د سیګنال اسانه تنظیم کول یوه لویه ګټه ده.

Exponential RCA، چې د Hyper branched amplification HRCA (Hyper branched RCA) په نوم هم پیژندل کیږي، په ایکسپینینشل RCA کې، یو پرائمر د RCA محصول پراخوي، دویم پریمر د RCA محصول سره هایبرډیز کوي او پراخوي، او بدیل لا دمخه د RCA محصول پورې تړلی دی، د ښکته جریان پرائمرونه سټرنډ پراخوي، او د RCA محصول د تکرار امپلیفیکیشن امپلیفیکیشن تولید لپاره.

د رولینګ حلقې نیوکلیک اسید امپلیفیکیشن ګټې او زیانونه

د RCA ګټې:

لوړ حساسیت، ښه ځانګړتیا او اسانه عملیات.

د RCA نیمګړتیاوې:

د سیګنال کشف پرمهال د شالید ستونزې.د RCA عکس العمل په جریان کې، د غیر سرک شوي پیډ لاک تحقیقات او د انباؤند تحقیقات DNA یا RNA ټیمپلیټ ممکن ځینې شالید سیګنالونه رامینځته کړي. 

Nد ucleicacid تسلسل پر بنسټ امپلیفیکشن

د نیوکلیک اسید ترتیب پر بنسټ امپلیفیکیشن (NASBA) یوه نوې ټیکنالوژي ده چې د PCR پر بنسټ رامینځته شوې.دا یو دوامداره او اسوترمل نیوکلیک اسید امپلیفیکیشن دی چې د T7 پروموټر ترتیب سره د پریمرونو جوړه لخوا لارښود کیږي.دا ټیکنالوژي کولی شي په شاوخوا 2 ساعتونو کې د RNA ټیمپلیټ 109 ځله پراخه کړي ، کوم چې د دودیز PCR میتود څخه 1000 ځله لوړ دی او ځانګړي تجهیزاتو ته اړتیا نلري.

دا ټیکنالوژي له څرګندیدو سره سم د ناروغیو ګړندي تشخیص لپاره کارول شوې ، او ډیری شرکتونه دا مهال د RNA کشف کټونو کې دا میتود کاروي.

که څه هم RNA امپلیفیکیشن کولی شي د ریورس ټرانسکرپشن PCR ټیکنالوژي هم وکاروي، NASBA خپلې ګټې لري: دا د نسبتا ثابت تودوخې شرایطو لاندې ترسره کیدی شي، او دا د دودیز PCR ټیکنالوژۍ په پرتله خورا باثباته او درست دی.

عکس العمل په 41 درجې سانتي ګراد کې دی او د بشپړولو لپاره AMV (avian myeloblastosis virus) reverse transscriptase, RNase H, T7 RNA پولیمریز او یو جوړه پریمر ته اړتیا لري.

په پروسه کې په عمده توګه شامل دي:

فارورډ پریمر د T7 پروموټر بشپړونکي ترتیب لري.د عکس العمل په جریان کې، فارورډ پریمر د RNA سټنډ سره تړل کیږي او د AMV انزایم لخوا کتل کیږي ترڅو د DNA-RNA ډبل سټینډ جوړ کړي.

RNase H RNA په هایبرډ ډبل سټنډ کې هضم کوي او د واحد ډنډ DNA ساتي.

د ریورس پریمر او AMV انزایم د عمل لاندې، د DNA ډبل سټنډ چې د T7 پروموټر ترتیب لري رامینځته کیږي.

د T7 RNA پولیمریز د عمل لاندې، د لیږد بهیر بشپړ شوی او د هدف RNA لوی مقدار تولید کیږي.

د NASBA ګټې:

(1) د دې پرائمر د T7 پروموټر سلسله لري، مګر بهرنۍ ډبل سټرینډډ DNA د T7 پروموټر ترتیب نلري او نشي کولی پراخ شي، نو دا ټیکنالوژي لوړ ځانګړتیا او حساسیت لري.

(2) NASBA په مستقیم ډول د ریورس لیږد پروسه د امپلیفیکیشن غبرګون کې شاملوي، د غبرګون وخت لنډوي.

د NASBA زیانونه:

(1) د غبرګون اجزا ډیر پیچلي دي.

(2) د عکس العمل لوړ لګښت لپاره درې ډوله انزایمونو ته اړتیا ده.