په دې وروستیو کې، ما یو څه حیرانتیا وموندله!د هغه په ​​​​شاوخوا کې ډیری پرمختللي تجربه لرونکي متخصصین حتی د لومړني تجربوي پوهې ټکي نه پوهیږي.

د مثال په توګه، تاسو کولی شئ لاندې پوښتنو ته ځواب ووایاست؟

ایا د OD260 او A260 ترمنځ توپیر شتون لري؟هر یو څه معنی لري؟
OD د نظری کثافت (نظری کثافت) لنډیز دی، A د جاذب (جذب) لنډیز دی، دواړه مفهومونه په حقیقت کې یو شان دي، "نظری کثافت" "جذب" دی، مګر "نظری کثافت" د ډیری ملي معیارونو سره سمون لري او نور معیاري شوي.

معمولا موږ د OD ارزښت په 260nm اندازه کوو ترڅو د نیوکلیک اسید غلظت محاسبه کړو، نو 1OD څه استازیتوب کوي؟
نیوکلیک اسید د 260nm په طول موج کې د جذب اعظمي حد لري، کوم چې دواړه DNA او RNA لري، او همدارنګه د نیوکلیک اسید ټوټې ټوټې شوي (دا کلیدي ټکی دی).
د OD ارزښت د 260 nm طول موج کې اندازه شوی د OD260 په توګه ثبت شوی.که نمونه خالصه وي، د OD260 ارزښت کولی شي د نیوکلیک اسید نمونې غلظت محاسبه کړي.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (دوه اړخیزه DNA)
= 37 μg/ml ssDNA (واحد ډنډ شوی DNA)
40 μg/ml RNA
= 30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
آیا د RT-PCR، Realtime-PCR او QPCR ترمنځ کوم تړاو او توپیر شته؟
RT-PCR د ریورس ټرانسکرپشن PCR لپاره لنډ دی
د ریښتیني وخت PCR = qPCR، د کمیتي ریښتیني وخت PCR لپاره لنډ
که څه هم د ریښتیني وخت PCR (ریښتیني وخت فلوروسینټ مقداري PCR) او ریورس ټرانسکرپشن PCR (ریورس ټرانسکرپشن PCR) دواړه د RT-PCR په توګه لنډیز ښکاري.مګر نړیوال کنوانسیون دا دی: RT-PCR په ځانګړې توګه د ریورس لیږد PCR ته اشاره کوي.

په بیولوژي کې د DNA/RNA اوږدوالی تشریح کولو لپاره په عام ډول کارول شوي nt، bp، او kb کوم دي؟
nt = نیوکلیوټایډ
bp = اساس جوړه بیس جوړه
kb = کیلوبیس

البته، تاسو به ووایاست چې ډیری خلک د دې کوچنیو توضیحاتو پروا نه کوي!هرڅوک دا کوي، او هیڅوک به تاسو نه پوښتنه وکړي چې دا څه دي.تاسو پوهیږئ چې دا غیر ضروري ده، سمه ده؟

نه، نه، نه، په دې پوهېدل ډېر اړین دي!د کوم له امله؟
ځکه چې تاسو غواړئ یوه مقاله پوسټ کړئ!ورور!که تاسو د فراغت هدف یاست یا د ساینسي څیړنو لاسته راوړنې تعقیب کوئ ، تاسو باید د خبرو کولو لپاره مقالو باندې تکیه وکړئ!

د نیوکلیک اسید استخراج باید ترټولو ساده او خورا اساسي تجربه وي.د نیوکلیک اسید استخراج کیفیت مستقیم د راتلونکو تجربو پایلې ټاکي.

که څه هم ما دا څو ځله ویلي دي، لاهم ډیری ملګري شتون لري چې پروا نه کوي.دا ځل ما پریکړه وکړه چې د مقالې څخه لیرې شم!

د کمیتي ریښتیني وخت PCR تجربو خپرولو لپاره لږترلږه معلومات چې د MIQE په نوم یادیږي، د فلوروسینس کمیتي تجربې لارښودونو یوه مجموعه ده چې په نړیواله کچه پیل شوي ، کوم چې د فلوروسینس کمیتي PCR تجربو ارزونې او مقالې خپرولو لپاره اړین تجربوي معلوماتو لپاره لږترلږه معیارونه وړاندیز کوي.د تجربوي شرایطو او تحلیلي میتودونو له لارې چې د تجربه کونکي لخوا چمتو شوي، بیاکتونکي کولی شي د څیړونکي د تجربوي سکیم اعتبار ښه ارزونه وکړي.

دا لیدل کیدی شي چې د نیوکلیک اسید استخراج برخه کې، لاندې کشف توکي وړاندیز شوي دي:

"E" هغه معلومات په ګوته کوي چې باید چمتو شي او "D" هغه معلومات په ګوته کوي چې د اړتیا په صورت کې باید چمتو شي.

فورمه خورا پیچلې ده، په حقیقت کې، زه غواړم ووایم چې هرڅوک باید له پیل څخه پیل شي

پاکوالي (D)، حاصل (D)، بشپړتیا (E) او ثبات (E) په دې څلورو اړخونو کې د نیوکلیک اسیدونو ارزولو لپاره.

د تجربوي عادتونو له مخې، لومړی د پاکوالي او تمرکز د ارزونې میتودونو په اړه خبرې وکړئ.

د OD اندازه کول د تجربه کونکو لپاره غوره او اسانه کشف میتود دی.د اصولو په توګه، زه به دلته توضیحاتو ته لاړ نه شم.ډیری لابراتوارونه اوس الټرا مایکرو سپیکٹرو فوټومیټرونه کاروي ترڅو په مستقیم ډول د نیوکلیک اسید نمونې تحلیل کړي.پداسې حال کې چې د جذب ارزښت ښودل کیږي، برنامه مستقیم د غلظت ارزښت (نیوکلیک اسید، پروټین او فلوروسینټ رنګ) او اړوند تناسب ورکوي.لکه څنګه چې د OD ارزښت تحلیل لپاره، دا انځور خوندي کړئ او تاسو به ښه یاست.

د نړیوال OD ارزښت حل لیست

په هرصورت، دلته یو څو احتیاطونه شتون لري چې باید ستاسو لپاره په جلا توګه راوړل شي.

(په هرصورت، زه پوهیږم چې تاسو باید هغه څوک یاست چې خوندي یې کړئ او انتظار وکړئ تر هغه چې تاسو ورته اړتیا لرئ!)

نوټ 1 تجهیزات

د OD ارزښت به د مختلف تجهیزاتو لخوا اغیزمن شي.تر هغه چې OD260 په یو ټاکلي حد کې وي، د OD230 او OD280 ارزښتونه معنی لري.د مثال په توګه، د عام Eppendorf D30 د جذب حد په 260nm کې 0~ 3A دی، او د ترمو نانو ډراپ یو په 260nm کې دی.د جذب حد د 0.5 ~ 62.5A.

یادښت 2د کمولو ریجنټ

د OD ارزښت د مختلف ریجنټونو د کمولو لخوا اغیزمن کیدی شي.د مثال په توګه، په pH کې د پاک شوي RNA OD260/280 لوستل7.5 10mm ټریسبفر د 1.9-2.1 ترمنځ دی، پداسې حال کې چېغیر جانبدار آبی محلولتناسب به ټیټ وي، شاید یوازې 1.8-2.0 وي، مګر دا پدې معنی ندي چې د RNA کیفیت توپیر لري.

یادونه 3پاتې شوي مواد

د پاتې شونو موجودیت به د نیوکلیک اسید غلظت د اندازه کولو په دقت اغیزه وکړي، نو دا اړینه ده چې د نیوکلیک اسید نمونو کې د پروټین، فینول، پولیساکریډ او پولیفینول پاتې شونو څخه د امکان تر حده مخنیوی وشي.

په هرصورت، په حقیقت کې، د عضوي ریجنټونو سره استخراج یو زوړ میتود دی.په سوداګریزو کټونو کې، د استخراج اغیز د سیلیکا پر بنسټ د جذب کولو کالم له لارې ترلاسه کیدی شي چې د سینټرفیوګریشن سره یوځای کیږي، د زهرجن او زیان رسونکي عضوي اجزاوو څخه مخنیوی کوي چې لرې کول یې ستونزمن وي، او داسې نور. ستونزه، لکهد فارجین د نیوکلیک اسید استخراج کټ، د عملیاتو په جریان کې DNase/RNase او زهرجن عضوي ریجنټونه نه کاروي، چټک او خوندي, او داغیزه دهښه(په ناڅاپه توګه وویل چې دا ګنج وه، مګر زه پوهیږم چې تاسو غواړئ پوه شئ).

1 بېلګه: د جینومیک DNA استخراج حاصل او پاکوالی

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) د مختلفو سرچینو څخه د خاورې نمونې درملنه کوي، او د ترلاسه شوي جینومیک DNA اندازه او پاکتیا په لاندې جدول کې ښودل شوي:
2 بېلګه: د نسج RNA استخراج حاصل او پاکوالی

د حیواناتو ټول RNA جلا کولو کټ (RE-03012) د مختلفو نسجونو نمونې پروسس کړې، او د ترلاسه شوي RNA اندازه او پاکتیا په لاندې جدول کې ښودل شوي (د موږک نسج لپاره):
په هرصورت، فکر مه کوئ چې تاسو د OD ارزښت سره ترسره شوي.ایا تاسو کوم مهم ټکي په پام کې لرئ چې ما ستاسو لپاره په مخ کې راښکاره کړي؟

خبرتیا

ټوټې شوي نیوکلیک اسید مالیکولونه به هم په جذب کې محاسبه شي.فرض کړئ چې تاسو په RNA کې د جینومیک DNA پاتې شوني لرئ، ستاسو د OD ارزښت به خورا لوړ وي، مګر د RNA اصلي غلظت نشي ټاکل کیدی.ایا ستاسو RNA دی دا روښانه نده چې ایا تخریب شتون لري، نو موږ لاهم د ارزونې جامع میتود ته اړتیا لرو ترڅو نور دقیق قضاوت وکړو، دا د نیوکلیک اسید بشپړتیا ارزونه ده چې په MIQE کې ذکر شوي.