د ګلو ریکوری ښه کولو لپاره لارښوونې

1. د الیکٹروفورسیس په وخت کې د نمونې بار زیات کړئ.

2. د تازه چمتو شوي الیکٹروفورسیس بفر څخه کار واخلئ.

3. کله چې د ګلو پرې کول، هڅه وکړئ چې یوازې د پټو سره ګولۍ پرې کړئ ترڅو د ګلو پرې کولو حجم کم کړي: د څو هدفونو ټوټې سره ګلو ته اړتیا نلري، که نه نو دا به د بیا رغونې کچه اغیزه وکړي.

4. وروسته له دې چې د ګلو دوه یا څو ټوټې وخورئ، یو ټیوب وکاروئ که څه هم حجم څومره لوی وي او ورته کالم ته یې انتقال کړئ.

5. په sol کې اضافه شوي محلول یو څه ډیر کیدی شي، کوم چې د DNA غشا ته د تړلو لپاره ډیر مناسب دی، مګر عموما د 750ul څخه ډیر نه وي.

6. د جیل د بیا رغونې کلیدي دا ده چې DNA د کالم سره د مالګې غلظت، تیزابیت (چارج) او په کالم کې د محلول هایدروفوبیکیت له لارې وتړل شي.له همدې امله، که د الیکٹروفورسیس بفر pH خورا لوړ وي، 10ul (pH 5.0, 3mol/L NaAC) په سول کې اضافه کیدی شي؛د دې لپاره چې په غشا کې د DNA مالیکولونه ښه مداخله وکړي، 30٪ isopropanol د ګلو له مینځلو وروسته په مایع کې تودوخې ته اضافه کیدی شي.

7. مخکې له دې چې ایلوینټ اضافه کړئ، کالم د خونې په حرارت کې د څو دقیقو (شاوخوا 10 دقیقو) لپاره پریږدئ ترڅو ایتانول په بشپړه توګه تبخیر شي.

8. په پای کې، د بیا رغونې حجم کمولو لپاره لږ ایلوین اضافه کړئ.عموما، 30-50μl ایلیوینټ د elution لپاره کارول کیږي (ډیر لږ نه، که نه نو دا به د غشا لندبل کولو توان ونلري، کوم چې د elution لپاره مناسب نه وي)؛د elution څاڅکي د غشا په مرکز کې دي، ترڅو په بشپړه توګه د غشا تړل شوي DNA روښانه کړي.

9. د ایلوینټ د اضافه کولو وروسته، دا د 55 درجو په اوبو حمام کې د 5 دقیقو لپاره ایښودل کیدی شي یا د 50 درجو په اوبو حمام کې د 10 دقیقو لپاره کیښودل شي، یا د پارافیلم سره د شپې په 4 درجو کې مهر کړئ، او بیا د بیا رغونې لپاره بله ورځ سینټرفیوډ کړئ، اغیزه ښه ده.

10. سینټرفیوژ شوی ایلیویټ بیرته د جذب کالم ته اضافه کړئ او بیا سینټرفیوج کړئ.

د PCR محصول بیا رغولو لپاره تفصيلي میتودونه او طرزالعملونه

1. عادي ربړ ریسایکل کول

که تاسو غواړئ چې ګولۍ بیرته ترلاسه کړئ، نو دا غوره ده چې یو کټ وکاروئ، کوم چې مناسب دی او د بیا رغونې کچه یو څه لوړه ده.که تاسو واقعیا اړتیا لرئ دا په لاسي ډول بیرته ترلاسه کړئ ، تاسو کولی شئ د ګلو پرې کولو وروسته د TE حجم 3 ځله اضافه کړئ.د اوبو په حمام کې د خړوبولو وروسته، فینول، فینول / کلوروفارم په پاکه توګه ایستل کیږي، او ایتانول پریپیټیټ کیږي.همدا و.

2. د ټیټ خټکي نقطو جیلونو څخه د DNA بیا رغونه

د DNA ټوټې پاکول د جیل حجم سره مساوي TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) اضافه کړئ او د 65 درجې سانتي ګراد اوبو حمام کې د 5 دقیقو لپاره ځای په ځای کړئ ترڅو جیل په بشپړ ډول منحل شي.

وروسته له دې چې دا د خونې تودوخې ته راوړل شو، یو مساوي مقدار فینول (د TE سره سنتر شوی، TE په پورتنۍ طبقه کې مهر شوی، او د فینول ټیټ پرت لیرې شوی) اضافه شوی، او مخلوط په نرمۍ سره مخلوط شوی (د مخلوط کولو اړتیا نشته)، او په 12,000 rpm کې د 3 دقیقو لپاره سینټرفیوج شوی.1-2 ځله تکرار کړئ.

سپرناټینټ واخلئ، د ایتانول باران ترسره کولو لپاره د 3mol/L سوډیم اسټیټ (pH 5.2) 0.1 حجم او د مطلق ایتانول 2.5 ځله حجم اضافه کړئ.پاک شوی DNA د مناسب مقدار TE سره تحلیل کړئ، محتوا اندازه کړئ، او د کارونې لپاره چمتو کړئ (دا د هدف جین جوړښت تحلیل، د تحقیقاتو چمتو کولو، او نور لپاره کارول کیدی شي).

3. د PCR بیا رغونه د ښه پراخولو ځانګړتیا سره

که د PCR امپلیفیکیشن ځانګړتیا ښه وي، دا یوازې د PCR محصول پاکول او بیا رغونه ده.تاسو کولی شئ د PCR محصول ته 50ug/ml پروټیناز K اضافه کړئ، د 1h لپاره 37 درجې، یو ځل د فینول/کلوروفارم سره استخراج کړئ، یو ځل د کلوروفارم سره استخراج کړئ، او د سپرناټینټ 0.1 حجم اضافه کړئ.سوډیم اسټیټ د 2.5 حجم مطلق ایتانول سره د باران په واسطه بیرته ترلاسه شو.

اړوند توليدات:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/