دودیز ریورس ټرانسکریټسونه نشي کولی لوړه تودوخه برداشت کړي (د MMLV فعالیت لپاره مطلوب تودوخه 37-50 °C ده، او AMV 42-60 °C ده).ډیر پیچلي ویروس RNA نشي کولی په مؤثره توګه په ټیټ تودوخې کې cDNA ته نقل شي، چې په پایله کې د کشف موثریت کمیږي.دودیز RT-qPCR عموما د دوه کلیدي انزایمونو (ریورس ټرانسکریټیس او DNA پولیمریز) ګډون ته اړتیا لري ، کوم چې د عکس العمل سیسټم عملیات ساده کول او لګښت کمول ناممکن کوي.دلته به موږ دوه د لوړې تودوخې مقاومت لرونکي ریورس ټرانسکریټسونه معرفي کړو، TtH او RevTaq.دا دوه انزایمونه د DNA پولیمریز فعالیت هم لري، نو دوی ته دوه اړخیز انزایمونه ویل کیږي.

TtH DNA پولیمیریز

تاسو باید د TtH په اړه اوریدلي وي، کوم چې د Thermophilic باکتریا Thermus Thermophilus HB8 څخه اخیستل شوی.د divalent cations په شتون کې لکه Mg2+، دا د DNA پولیمریز فعالیت لري.دا په پراخه کچه د PCR تعاملاتو لکه Taq انزایمونو کې کارول کیږي ، مګر دا د Taq انزایم په پرتله د تودوخې لوړ مقاومت لري ، نو دا د لوړ GC مینځپانګو ټیمپلیټونو سره په PCR باندې هم ښه اغیزه لري.

· دا انزایم اساسا د 3′→5′ exonuclease فعالیت او 5′→3′ exonuclease فعالیت نلري، نو دا د Dideoxy تسلسل لپاره هم کارول کیدی شي.

· دا انزایم د RTase فعالیت لري.د Mn2+ په شتون کې، د RTase فعالیت به وده ومومي.د دې خصوصیت په کارولو سره ، دا په ورته ټیوب کې د ریورس لیږد عکس العمل او PCR عکس العمل ترسره کولو لپاره کارول کیدی شي ، دا یو ګام RT-PCR دی.په هرصورت، د Mn2+ په شتون کې، د RT-PCR دقت لوړ ندی.د RT فعالیت د rnaase H فعالیت سره هیڅ تړاو نلري.

· د Tth-DNA پولیمریز زیات فعالیت (pH9، مطلوب +55℃～+70℃، اعظمي +95℃) د RNA ثانوي جوړښت له امله رامینځته شوي ستونزې له منځه وړي.نتیجه اخیستونکی cDNA د PCR لخوا د ورته انزایم سره د Mg2+ آیونونو په شتون کې پراخه کیدی شي.

· د Tth-DNA پولیمیریز وړتیا په لوړه تودوخه کې د ریورس ټرانسکرپشن او DNA امپلیفیکیشن ترسره کولو لپاره دا انزایم د RT-PCR، کلونینګ او د حجرو او ویروس RNA د جین څرګندولو تحلیل لپاره ګټور کوي.
· Tth-DNA پولیمیریز د RT-PCR لپاره کارول کیږي ترڅو RNA تر 1kb پورې پراخه کړي.

ځانګړتیاوې او ګټې

Tth DNA پولیمریز:

• د مطلوب پولیمیریز چین عکس العمل (PCR) محصول اندازه یقیني کړئ، لږترلږه 1000 bp په RT-PCR عکس العمل کې

• تعدیل شوی deoxyribonucleoside triphosphate د سبسټریټ په توګه قبول کړئ

• د RNase H فعالیت سره تړاو نلري

• د ستونزو د له منځه وړلو لپاره لوړ حرارتي ثبات لري، معمولا په RNA کې د لوړ ثانوي جوړښت سره تړاو لري

RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز

د تودوخې په وړاندې مقاومت لرونکی DNA پولیمیریز د ریورس ټرانسکریټیس فعالیت سره

RevTaq-RT-PCR-DNA پولیمیریز یو انجنیر شوی، د تودوخې په وړاندې مقاومت لرونکی، دوه ګونی فعال انزایم دی چې د ریورس ټرانسکریپټیس او DNA پولیمیریز فعالیتونه د لارښود او مصنوعي تکامل له لارې ترلاسه شوي.

· د RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز نیم ژوند په 95°C کې له 40 دقیقو څخه ډیر دی.

· RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز د RNA ټیمپلیټ څخه په مستقیم ډول د لوړې تودوخې ریورس لیږد ته اجازه ورکوي، او د بیرته راګرځیدونکي لیږد مرحله څو ځله تکرار کیدی شي ترڅو نور cDNA ټیمپلیټونه رامینځته کړي.

· RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز "صفر-پړاو" RT-PCR ته اجازه ورکوي (هیڅ تودوخې ریورس ټرانسکرپشن ګام نه دی)، ځکه چې د سایکلیک PCR توسیع مرحله کې، ریورس لیږد او د DNA امپلیفیکیشن په یو وخت کې واقع کیږي.دا په لوړه تودوخه کې د ریورس لیږد عکس العمل ته وده ورکوي، په دې توګه هغه ستونزې کموي چې په RNA کې په لوړه تودوخه کې د قوي ثانوي جوړښت په خړوبولو کې ورسره مخ کیږي.

· د اپټامر پر بنسټ د هاټ سټارټ فارمول له امله، RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز به غوره پایلې تولید کړي کله چې د انیل کولو او تودوخې تودوخه د 57 درجې سانتي ګراد څخه لوړه وي.

· څرنګه چې انزایم د تودوخې په وړاندې مقاومت لري، نو سپارښتنه کیږي چې پرائمرونه او پروبونه د ډیر لوړ خټکي پوائنټونو سره ډیزاین کړئ (> 60 ° C).

· دا سپارښتنه کیږي چې د عکس العمل تنظیم کولو پروسې په جریان کې د تودوخې درجې له لارې د انیل کولو / تمدید مرحلې تودوخې غوره کړئ.

· څومره چې د حرارت درجه لوړه وي هغومره د PCR ځانګړتیا لوړه وي.د ریورس ټرانسکرپشن دوره معمولا د PCR دورې په پرتله په لوړه تودوخه کې ترسره کیږي، ځکه چې د DNA پرائمر: RNA ټیمپلیټ هایبرډیزیشن معمولا د DNA پریمر: cDNA ټیمپلیټ ډوپلیکس په پرتله لوړ خټکي نقطه لري.

· RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز په جینیکي ډول انجینر شوی او مطلوب دی، او د امپلیکون اندازه د 60-300 bp ترمنځ ده.

RevTaq RT-PCR DNA پولیمیریز کشف حد 4 کاپي ته رسي /

د مطلوب عکس العمل سیسټم (د لوړ خټکي نقطې پریمرونو رامینځته کول) په شکل کې ښودل شوي.RevTaq RT-PCR DNA پولیمیریز چلول RT-PCR د TaqPath 1-Step RT-qPCR ماسټر مکس په پرتله ښه حساسیت ښیې، او د ټیټ کشف نمونې کمولو تدریجي.

نورې ګټې:

د چټک پیل فعالیت ← د تودوخې د تخریب لومړنی مرحله پریښودل کیدی شي.

د هاټ سټارټ اپټامر فارمول → په سمدستي توګه د 100٪ انزایم فعالیت چمتو کړئ او په ټیټ تودوخې (<57°C) کې د غیر مشخص لوړیدو مخه ونیسئ.

د پاکولو فعالیت ← د RNA استخراج مرحله پریښودل شوې، ځکه چې RevTaq RT-PCR DNA پولیمریز کولی شي د خام غبرګون نمونې پروسس کړي.دا کولی شي سمدلاسه په ګرم RT-PCR دوره کې د یوکریټس ، باکتریا او ویروسونو حجرو غشا له مینځه ویسي.

د IVD د خامو موادو کچه → د لوړ کیفیت معیارونه او خورا رقابتي نرخونه