RNase یوه حساسه کلمه ده چې ډیری زده کونکي چې ډیری وختونه د RNA استخراج تجربې ترسره کوي نه غواړي چې واوري.په بشپړ ډول مسلح، RNA چې په پای کې د خورا زهرجن ریجنټونو فینول او کلوروفارم سره ایستل شوی و تخریب شوی.زه پخلا شوی نه یم!!!نن ورځ، راځئ چې د مشهور Rnase اصل ته یوه کتنه وکړو.

Ribonuclease (RNase)، یا RNase، یو نیوکلیز دی چې کولی شي RNA په کوچنیو مالیکولونو کې هایدرولیس کړي.RNase، د کوچني مالیکول پروټین په توګه، په غیر معمولي توګه باثباته دی .دودیز لوړ حرارت او لوړ فشار د بخار تعقیم او د پروټین مخنیوی کونکي نشي کولی دا په بشپړ ډول غیر فعال کړي.د RNase ثبات په عمده توګه په جوړښت کې د ډیسلفایډ بانډونو څخه راځي.د مثال په توګه، د غوایانو پانقراص عام کارول شوي RNase یوازې 124 امینو اسیدونه لري، مګر 4 ډیسلفایډ بانډونه لري.د سلفر بانډ او ډیسلفایډ بانډ RNase د غوره حرارتي ثبات سره پای ته رسوي.سربیره پردې، rnase نسبتا کوچنی مالیکولر وزن لري او کولی شي په ډیری قضیو کې ژر تر ژره خپل اصلي جوړښت بیرته راولي.

د خورا باثباته کیدو سربیره ،RNases په لابراتوار کې په هر ځای کې شتون لري .RNase یو بیولوژیکي دفاعي میکانیزم دی.د یوې حجرې لپاره، خارجي RNA اکثرا وژونکي وي.د exogenous DNA په پرتله، exogenous RNA اکثرا ډیر خطرناک وي.RNA په خوښۍ سره لیکل شوی او ژباړل شوی، نو نږدې ټولو ژوندی موجوداتو RNases رامینځته کړی ترڅو د خارجی RNA د یرغل په وړاندې دفاع وکړی.له همدې امله، په لابراتوار کې کرل شوي باکتریا حجرې او تاسو چې RNA استخراج کوئ د RNase بوی خارجوي.د انسان د بدن مایعات (لعاب، اوښکې، او داسې نور) په زیاته اندازه RNase لري، نو کله چې RNA تخریب شي نو مه ژاړئ.څومره چې تاسو ژاړئ، د RNA تخریب به بدتر وي!!خور دایو د RNA استخراج لپاره مناسبه نه ده!

سربیره پردې ، ستاسو نازک پوټکی هم ډیری RNase لري ، او مارکرونه ، پایپټونه ، د یخچال دروازې او د دروازې لاسي چې د پوټکي لخوا لمس شوي هم RNase لري.

د دومره ډیر لامبو وهلو سره ، راځئ چې یو نظر وګورو چې څنګه د RNases سره معامله وکړو.

لومړی شی چې هرڅوک د RNA لرې کولو په اړه فکر کويDEPC((ډایتیل پیرو کاربونیټ).DEPC په عمده توګه د RNase فعال ګروپ هسټیډین د امیدازول حلقې سره یوځای کولو سره پروټین ردوي، په دې توګه د انزایم فعالیت منع کوي.0.1% DEPC کولی شي په Rnase باندې د لرې کولو غوره اغیزه ولري، مګر موږ باید دې ته پام وکړو چې DEPC یو پیژندل شوی کارسنجن دی، نو د کارولو په وخت کې باید ځانګړې پاملرنه وشي.

د RNase لپاره، موږ باید له دوو اړخونو پیل وکړو،لومړی د Endogenous RNase فعالیت منع کول دي

دودیز RNA استخراج ریجنټونه لکه guanidine isothiocyanate او DTT چې په Trizol کې موجود دي کولی شي د RNase ډیسلفایډ بانډ خلاص کړي، مګر لاهم ځینې RNases شتون لري، په ځانګړې توګه د نسجونو په نمونو کې، نو د ټیټ حرارت درجه ته پام وکړئ.

1.سمدلاسه د نسج نمونه د ایستلو وروسته په مایع نایټروجن کې ډوب کړئ، یا په سوداګریز RNA محافظت محلول کې.

2.د حجرې نمونې د RNA ایستلو وروسته، دا د لیسز محلول کې اضافه کړئ او په یخ بکس کې یې لیز کړئ.

3. دا غوره ده چې د پیسولو لپاره د مایع نایتروجن څخه کار واخلئ کله چې د نسج نمونې همغږي شي.کله چې د مایع نایټروجن پرته بریښنایی هوموجینائزر وکاروئ ، د هوموجنیټ اډاپټر په بشپړ ډول پری یخولو ته پاملرنه وکړئ.

دوهم خارجي DNase دی

1.په بشپړه توګه وسله ولرئ، لابراتوار کوټ واغوندي، ماسک واغوندي، او ډاډه اوسئ چې یو جوړه نوي دستکشې واغوندي (دومره کفایت مه کوئ!! دا باید په پام کې ونیول شي چې ټریزول خورا زیانمنونکی دی، او دا د دستکشو له لارې هم خورا پیاوړی دی، نو په خپلو لاسونو مه څکوئ).

2.ټول کارول شوي پایپټ لارښوونې، EP ټیوبونه، PCR ټیوبونه او نور تجهیزات باید د RNase درملنه وشي.دا کولی شي په 0.1٪ DEPC کې ډوب شي او بیا د لوړ فشار لاندې فشار راوړي.په فوم هود کې عملیاتو ته پاملرنه وکړئ.سیمه ایز ظالمان کولی شي په مستقیم ډول د انزایمونو لرې کولو لپاره مصرفي توکي واخلي.

PS: اجازه راکړئ تاسو ته یو سست طریقه ووایم.که څه هم لوړه تودوخه او لوړ فشار نشي کولی په بشپړ ډول RNase لرې کړي ، دا به د هغې لویه برخه لرې کړي.د لوړ حرارت او لوړ فشار 2 ځله ښه اغیزه لري، او د RNA استخراج لږ اغیز لري.

3.الکول کولی شي پروټینونه تخریب کړي ،نو د RNA استخراج میز د 75٪ الکول سره پاک کیدی شي ، او دستکشې هم د الکول سره سپرې کیدی شي.

4.د RNA وروستی تحلیل محلول او سینټرفیوج ټیوب هم باید د RNase درملنه وشي.د DEPC اوبه په عام ډول کارول کیږي د RNA تحلیل کولو محلول.راځئ چې د DEPC اوبو د سم چمتو کولو میتود په اړه وغږیږو (په یاد ولرئ کله چې تاسو یې اخلئ د سوداګریز DEPC بیا بسته کول)

DEPC په 1:1000 کې الټرا پاکو اوبو ته اضافه کړئ، ښه وخورئ، پریږدئ چې د شپې په 37 درجو کې ودریږئ، او د 15 دقیقو لپاره د لوړې تودوخې او لوړ فشار لاندې په 121 ° C کې تعقیم کړئ.د DEPC اوبه په 1ml aliquots کې -20 °C کې زیرمه کیدی شي.

په نهایت کې ، لنډیز: ټیټ تودوخه کلیدي ده ، مصرف کونکي په ښه توګه اداره کیږي ، په بشپړ ډول وسله وال او لږ خبرې!

ښه، دا د نن ورځې ستراتیژۍ لپاره دی.زه تاسو ته د ټولو RNA غلظت او پاکوالي هیله کوم چې تاسو یې یادونه کړې.دواړه A260/A280 2.0 دي!!!

البته، که تاسو کاروئ aد خونې د حرارت درجه عملیات RNA استخراج کټ، تاسو ممکن د پورته ستونزو سره مخ نه شئ.

د خونې په حرارت کې عملیات، پرته له دې چې DNase اضافه کړي، په 11 دقیقو کې له حجرو څخه ټول RNA استخراجوي، او په 30 دقیقو کې د حيواناتو نسجونو یا نباتاتو څخه ټول RNA استخراجوي.

د آزموینې نمونې لپاره، مهرباني وکړئ اړیکه ونیسئ:overseas@foregene.com

اړوند توليدات:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/