د پایپټ لارښوونو او EP ټیوبونو تعقیم کول، او داسې نور.

1. 0.1% (یو زرو برخه) DEPC (ډیر زهرجن ماده) د ډیونیز شوي اوبو سره چمتو کړئ ، په احتیاط سره یې په فوم هوډ کې وکاروئ او د رڼا څخه په 4 درجې C لرې کې ذخیره کړئ؛

د DEPC اوبه خالص اوبه دي چې د DEPC سره درملنه کیږي او د لوړ حرارت او لوړ فشار لخوا تعقیم کیږي.د RNase، DNase او پروټیناز څخه پاک وي.

2. د پایپټ ټیوب او EP ټیوب په 0.1٪ DEPC کې واچوئ، او ډاډ ترلاسه کړئ چې د پایپټ ټپ او EP ټیوب د 0.1٪ DEP سره ډک شوي.

3. د رڼا څخه ساتنه وکړئ، پریږدئ، د شپې (12-24h)

4. هغه بکس چې ټیپ او EP ټیوب لري اړتیا نلري په DEPC کې لندبل شي.په ټیپ یا EP ټیوب کې د DEPC اوبه نږدې لرې کولو وروسته ، دا بسته کړئ او لپاسه یې کړئ.

5. 121 درجې سانتي ګراد، 30min

6. 180 درجې سانتي ګراد، د څو ساعتونو لپاره وچ (لږترلږه 3 ساعته)

یادونه: الف.د DEPC اداره کولو پرمهال د لیټیکس دستکشې او ماسکونه واغوندئ!b، یا د DEPC تعقیم پرته، 130 ℃، 90min autoclave (ډیری لابراتوارونه دوه ځله لوړ حرارت تعقیم کول)

د RNA استخراج په پام کې نیولو سره

د نسج RNA جلا کولو ناکامي دوه مهمې پیښې

د RNA تخریب او په نسجونو کې د ناپاکۍ پاتې شوني،د تخریب په اړه، راځئ چې لومړی وګورو چې ولې د کلتوري حجرو څخه ایستل شوي RNA په اسانۍ سره نه خرابیږي.موجود RNA استخراج ریجنټونه ټول هغه برخې لري چې په چټکۍ سره RNase منع کوي.کرل شوي حجرو ته لیسیټ اضافه کړئ، او په ساده ډول یې مخلوط کړئ، ټولې حجرې په بشپړه توګه د لیسیټ سره مخلوط کیدی شي، او حجرې په بشپړه توګه لیز شوي دي.وروسته له دې چې حجرې lysate کیږي، په lysate کې فعال اجزا سمدلاسه د Intracellular RNase مخنیوی کوي، نو RNA پاتې کیږي.د دې لپاره چې ووایو، ځکه چې کلتور شوي حجرې په اسانۍ سره او په بشپړه توګه د لیسیټ سره اړیکه لري، د دوی RNA په اسانۍ سره نه خرابیږي؛له بلې خوا، په نسج کې RNA په اسانۍ سره تخریب کیږي ځکه چې په نسج کې حجرې په اسانۍ سره د lysate سره اړیکه نلري.د کافي تماس له امله.نو،داسې انګیرل چې د RNA فعالیت مخنیوي په وخت کې نسج په یوه حجره بدلولو لپاره یوه لاره شتون لري، د تخریب ستونزه په بشپړ ډول حل کیدی شي.

د مایع نایتروجن ملنګ ترټولو اغیزمنه طریقه ده.په هرصورت، د مایع نایتروجن ملنګ طریقه خورا ستونزمنه ده، په ځانګړې توګه کله چې د نمونو شمیر لوی وي.دا بل غوره شی ته وده ورکړه: هوموجینائزر.دهمجنس پرستمیتود دا پوښتنه په پام کې نه نیسي چې څنګه د RNase فعالیت مخنیوی کیږي مخکې لدې چې حجرې د lysate سره تماس کې شي ، بلکه دا دعا کوي چې د نسج اختلال کچه د هغه نرخ په پرتله ګړندۍ وي چې intracellular RNase RN تخریب کوي.

د بریښنایی هوموجنیزر اغیزه غوره ده ،او د شیشې هوموجینائزر اغیز ضعیف دی ، مګر په عموم کې ، د هوموګینائزر میتود نشي کولی د تخریب پیښې مخه ونیسي.له همدې امله، که استخراج تخریب شوی وي، اصلي بریښنایی هوموجنیزر باید د مایع نایتروجن سره د پیسولو لپاره وکارول شي؛اصلي شیشې هوموجینائزر باید په بریښنایی هوموجنیزر بدل شي یا په مستقیم ډول د مایع نایټروجن سره مل شي.ستونزه تقریبا 100٪ ممکنه ده.حل شي.

د ناپاک پاتې شونو ستونزه چې په راتلونکو تجربو اغیزه کوي د تخریب په پرتله ډیر متنوع لاملونه لري، او حلونه یې په ورته ډول توپیر لري.په پای کښې،که چیرې په نسج کې تخریب یا پاتې شوي ناپاکۍ شتون ولري، د ځانګړي تجربوي موادو لپاره د استخراج میتود/ریجنټ باید غوره شي.تاسو اړتیا نلرئ د اصلاح کولو لپاره خپل قیمتي نمونې وکاروئ: تاسو کولی شئ ځینې کوچني څاروي لکه کب / چرګ له بازار څخه واخلئ، د RNA استخراج لپاره د موادو اړونده برخه واخلئ، او بله برخه د پروټین استخراج لپاره - د خولې، معدې او کولمو سره پیس کړئ.

د استخراج شوي RNA هدف RNA د بیالبیلو تعقیبي تجربو لپاره کارول کیږي، او د کیفیت اړتیاوې یې توپیر لري.

د cDNA کتابتون جوړول د RNA بشپړتیا ته اړتیا لري پرته له دې چې د انزایم عکس العمل مخنیوی کونکي پاتې شي؛شمالي د لوړ RNA بشپړتیا او د انزایم عکس العمل مخنیوی کونکو پاتې شونو لپاره ټیټ اړتیاو ته اړتیا لري.RT-PCR ډیر لوړ RNA بشپړتیا ته اړتیا نلري،مګر د انزایمونو عکس العمل منع کوي.د پاتې شونو اړتیاوې سختې دي.ان پټ د محصول ټاکي؛هرکله چې هدف د لوړ پاکوالي RNA ترلاسه کول وي ، دا به خلک او پیسې مصرف کړي.

د نمونو راټولول / ذخیره کول

هغه فکتورونه چې په تخریب اغیزه کوي وروسته له دې چې نمونه د ژوندي بدن/یا د ودې اصلي چاپیریال پریږدي، په نمونه کې د Endogenous انزایمونه به د RNA په تخریب پیل وکړي،او د تخریب کچه د Endogenous انزایمونو او تودوخې په محتوا پورې اړه لري.په دودیز ډول، یوازې دوه لارې شتون لري چې په بشپړ ډول د Endogenous انزایم فعالیت منع کړي: سمدلاسه lysate اضافه کړئ او په بشپړه توګه او چټکۍ سره همغږي کړئ؛په کوچنیو ټوټو کې پرې کړئ او سمدلاسه په مایع نایټروجن کې کنګل کړئ.دواړه طریقې چټک عملیات ته اړتیا لري.وروستنۍ د ټولو نمونو لپاره مناسبه ده، په داسې حال کې چې پخوانی یوازې د نسجونو لپاره مناسب دی چې د حجرو او انډوجینز انزایمونو ټیټ محتويات لري او د یووالي لپاره اسانه دي.په ځانګړې توګه، د نبات نسج، ځيګر، تایموس، پانقراص، تڼی، دماغ، غوړ، د عضلاتو نسجونه، او نور د پرمخ وړلو دمخه د مایع نایتروجن سره ښه منجمد شوي.

د نمونو ټوټه کول او همغږي کول

هغه فکتورونه چې د تخریب او حاصلاتو د نمونې ټوټه ټوټه اغیزه کويد بشپړ همغږي کولو لپاره، کوم چې د RNA بشپړ او بشپړ خوشې کولو لپاره دی.حجرې پرته له دې چې مات شي مستقیم همغږي شي.نسجونه یوازې د ماتیدو وروسته همغږي کیدی شي.خمیر او باکتریا باید د اړونده انزایمونو سره مات شي مخکې لدې چې دوی همغږي شي.هغه نسجونه چې د ټيټ endogenous انزایمونو مینځپانګه لري او اسانه هوموجنیزیشن کولی شي په یو وخت کې د یو هوموجینائزر په واسطه په لیسیټ کې مات شي او همغږي شي.د نبات نسج، ځیګر، تایموس، پانقراص، تڼی، دماغ، غوړ، د عضلاتو نسج او نور نمونې، دوی یا د انډروجینس انزایمونو کې لوړ دي یا په اسانۍ سره یو شان نه کیږي،نو د نسج اختلال او همغږي باید په جلا توګه ترسره شي.د ټوټې کولو ترټولو باوري او خورا ګټور میتود د مایع نایتروجن سره مل کول دي، او د همغږي کولو ترټولو باوري میتود د بریښنایی هوموجنیزر کارول دي.د مایع نایتروجن سره د ملنګ کولو په اړه یو ځانګړی یادښت: نمونه باید د ټول ملنګ پروسې په جریان کې ونه غوړول شي، ځکه چې د اندوجینس انزایمونه ډیر احتمال لري کله چې منجمد شي فعالیت کوي.

د lysate انتخاب

د عملیاتو په اسانتیا اغیزه کوي او د پاتې پاتې داخلي ناپاکۍ عوامل په عام ډول کارول شوي لیسز محلولونه تقریبا د RNase فعالیت منع کولی شي.له همدې امله ، د لیسز حل غوره کولو کلیدي ټکی د پاکولو میتود سره په ترکیب کې په پام کې نیول دي.یو استثنا شتون لري:هغه نمونې چې د لوړ endogenous انزایمونو مینځپانګه لري سپارښتنه کیږي چې د فینول لرونکي lysate څخه کار واخلي ترڅو د endogenous انزایمونو غیر فعالولو وړتیا لوړه کړي.

د پاکولو میتود انتخاب

هغه فکټورونه چې د پاتې شونو اندروجن ناپاکۍ اغیزه کوي، د استخراج سرعت د پاکو نمونو لکه حجرو لپاره، د قناعت وړ پایلې تقریبا د هر ډول پاکولو میتود سره ترلاسه کیدی شي.مګر د ډیری نورو نمونو لپاره، په ځانګړې توګه هغه کسان چې د لوړې کچې ناپاکۍ لري لکه نباتات، ځيګر، باکتریا او نور، د مناسب پاکولو طریقه غوره کول خورا مهم دي.د کالم سینټرفیوګل پاکولو طریقه د استخراج ګړندۍ سرعت لري او کولی شي په مؤثره توګه هغه نجاستونه لرې کړي چې د RNA راتلونکي انزایمیک عکس العمل اغیزه کوي ، مګر دا ګران دی (فورجین کولی شي د لګښت مؤثره کټونه وړاندې کړي ، نور توضیحات کلیک وکړئدلته);د اقتصادي او کلاسیک پاکولو میتودونو کارول، لکه د LiCl باران، هم کولی شي د قناعت وړ پایلې ترلاسه کړي، مګر د عملیاتو وخت اوږد دی..

د RNA استخراج لپاره "درې ډسپلینونه او اته پاملرنه"

نظم 1:د خارجي انزایمونو ککړتیا پای ته ورسوي.

یادونه 1:په کلکه ماسکونه او دستکشې واغوندئ.

یادونه 2:د سینټرفیوج ټیوبونه، د ټیپ سرونه، د پایپټ راډونه، د الیکٹروفورسیس ټانکونه، او تجربه لرونکي بنچونه چې په تجربه کې ښکیل دي باید په بشپړه توګه تصفیه شي.

3 یادونه:هغه ریجنټ/حلونه چې په تجربه کې ښکیل دي، په ځانګړې توګه اوبه باید د RNase څخه پاک وي.

دسپلین ۲:د Endogenous انزایمونو فعالیت بندوي

۴ یادونه:د همغږي کولو مناسب میتود غوره کړئ.

۵ یادونه:یو مناسب لیسټ غوره کړئ.

یادښت 6:د نمونې پیل مقدار کنټرول کړئ.

درېیم نظم:ستاسو د استخراج موخه روښانه کړئ

۷ یادونه:د هر ډول لیسیټ سیسټم سره چې د نمونې اعظمي پیل شوي مقدار ته نږدې کیږي، د استخراج بریالیتوب کچه په چټکۍ سره راټیټیږي.

۸ یادونه:د بریالي RNA استخراج لپاره یوازینی اقتصادي معیار په راتلونکو تجربو کې بریالیتوب دی، نه حاصل.

د RNase ککړتیا 10 غوره سرچینې

1. ګوتې د خارجي انزایمونو لومړۍ سرچینه ده، نو دستکشې باید اغوستل شي او په مکرر ډول بدل شي.سربیره پردې ، ماسک هم باید اغوستل شي ، ځکه چې تنفس هم د انزایمونو یوه مهمه سرچینه ده.د دستکشې ماسک اغوستلو اضافي ګټه د تجربه کونکي ساتنه ده.

2. د پایپ ټایپونه، سینټریفیوج ټیوبونه، پایپټ - RNase نشي کولی یوازې د تعقیم کولو په واسطه غیر فعال شي، نو د پایپټ لارښوونې او سینټریفیوج ټیوبونه باید د DEPC سره چلند وشي، حتی که دوی د DEPC درملنې په توګه نښه شوي وي.دا غوره ده چې د ځانګړي هدف پایپټ وکاروئ ، د کارولو دمخه یې د 75٪ الکول کاټن بال سره مسح کړئ ، په ځانګړي توګه راډ؛سربیره پردې، ډاډ ترلاسه کړئ چې د سر ریموور نه کاروئ.

3. اوبه/بفر باید د RNase ککړتیا څخه پاک وي.

4. لږترلږه د ازموینې میز باید د 75٪ الکول کاټن بالونو سره پاک شي.

5. Endogenous RNase ټول نسجونه Endogenous انزایمونه لري، نو د مایع نایتروجن سره د نسجونو چټک کنګل کول د تخریب کمولو غوره لاره ده.د مایع نایتروجن ذخیره کولو / پیسولو طریقه په حقیقت کې ناامنه ده، مګر دا د نسجونو لپاره یوازینۍ لار ده چې د اندوجن انزایمونو لوړه کچه لري.

6. د RNA نمونې د RNA استخراج محصولات ممکن د RNase ککړتیا نښې ولري.

7. Plasmid استخراج Plasmid استخراج اکثرا د RNA د تخریب لپاره Rnase کاروي، او پاتې Rnase باید د Proteinase K سره هضم شي او د PCI لخوا استخراج شي.

8. د RNA ذخیره حتی که چیرې دا په ټیټ حرارت کې زیرمه شي، د RNase اندازه به د RNA تخریب لامل شي.د RNA د اوږدې مودې ساتنې لپاره غوره حل د مالګې/الکول تعلیق دی، ځکه چې الکول په ټیټ حرارت کې ټول انزایمیک فعالیت منع کوي.

9. کله چې کیشنونه (Ca, Mg) دا ایونونه ولري، د 5 دقیقو لپاره په 80C کې تودوخه به د RNA د بندیدو لامل شي، نو که چیرې RNA تودوخې ته اړتیا ولري، د ساتنې محلول باید د چیلیټینګ اجنټ ولري (1mM سوډیم سیټریټ، pH 6.4).

10. هغه انزایمونه چې په راتلونکو تجربو کې کارول کیږي کیدای شي د RNase لخوا ککړ شي.

د RNA استخراج لپاره 10 لارښوونې

1: په چټکۍ سره د RNase فعالیت مخه ونیسئ.نمونې د راټولولو وروسته په چټکۍ سره کنګل کیږي، او RNase د لیسز په جریان کې د چټک عملیاتو په واسطه غیر فعال کیږي.

2: د ریبوزیم لوړ مقدار لرونکي نسجونو لپاره د استخراج مناسب میتود غوره کړئ، او د adipose نسجونو لپاره غوره ده چې د فینول لرونکي میتود څخه کار واخلئ.

3: د وړاندوینې کیفیت شمالي ته اړتیا لري، د cDNA کتابتون جوړونه لوړې بشپړتیا ته اړتیا لري، او RT-PCR او RPA (Ribonuclease protection assay) لوړې بشپړتیا ته اړتیا نلري.RT-PCR لوړ پاکوالي ته اړتیا لري (د انزایم مخنیوی کونکي پاتې شونه).

4: بشپړ همغږي کول د حاصلاتو د ښه کولو او د تخریب کمولو کلیدي ده.

5: د RNA الیکٹروفورسس کشف بشپړتیا چیک کړئ، 28S: 18S = 2: 1 یوه بشپړه نښه ده، 1: 1 د ډیرو تجربو لپاره هم د منلو وړ دی.

6: د RT-PCR لپاره د DNA لرې کول، د سرې تحلیل دا غوره ده چې د DNA لرې کولو لپاره Dnase I وکاروئ.

7: د خارجي انزایمونو ککړتیا کمه کړئ - انزایمونه له بهر نه واردیږي.

8: کله چې د ټیټ غلظت نیوکلیک اسید غلظت وي، باید د باران ریجنټ اضافه شي.مګر د انزایمونو او DNA ککړتیا لرونکي شریک پریپیټینټ مخنیوي لپاره.

9: RNA په بشپړه توګه منحل کړئ، که اړتیا وي، د 5 دقیقو لپاره په 65C کې تودوخه کړئ.

د ذخیره کولو مناسب میتود

دا د لنډ وخت لپاره په -20C کې ذخیره کیدی شي، او په -80C کې د اوږدې مودې لپاره.د RNA حاصلاتو د ښه کولو لپاره لومړی ګام دا دی چې پوه شي چې د مختلفو نمونو د RNA منځپانګې خورا توپیر لري.لوړ کثرت (2-4ug/mg) لکه ځیګر، پانقراص، زړه، منځنۍ کثرت (0.05-2ug/mg) لکه دماغ، جنین، پښتورګي، سږي، تایموس، تخمدان، ټیټ کثرت (<0.05ug/mg) mg) لکه مثانه، هډوکي، غوړ.

1: د RN خوشې کولو لپاره لیز حجرې - که RNA خوشې نشي، حاصل به کم شي.د برقی هوموجینیزیشن د نورو هوموجنیزیشن میتودونو په پرتله ښه کار کوي، مګر ممکن د نورو میتودونو سره یوځای کولو ته اړتیا ولري، لکه د مایع نایتروجن میش کول، انزیماتیک هضم (Lysozyme/Lyticase)

2: د استخراج میتود اصلاح کول.د فینول پر اساس میتودونو کې ترټولو لوی ستونزې نیمګړتیاوې او د RNA جزوي ضایع کول دي (سپرناټینټ په بشپړ ډول نه شي ایستل کیدی).نیمګړتیا د لوړ نیوکلیک اسید او پروټین مینځپانګې له امله ده ، کوم چې د کارول شوي لیسیټ مقدار زیاتولو یا د نمونې مقدار کمولو سره حل کیدی شي.د کلوروفارم استخراج یو ګام د اډیپوز نسج ته اضافه شوی.د RNA ضایع د بیک پمپ کولو یا د عضوي طبقې لرې کولو سره چې د سینټرفیوګریشن لخوا تعقیب کیږي کم کیدی شي.د کالم سنټرفیوګریشن پراساس میتودونو سره ترټولو لویه ستونزه د اضافي نمونې اخیستل دي.

د کلاسیک استخراج لارښوونې

1. د فینول پاکول: د 1:1 فینول / کلوروفارم مساوي حجم اضافه کړئ او د 1-2 دقیقو لپاره په کلکه سره مخلوط کړئ.د 2 دقیقو لپاره په لوړ سرعت سینټرفیوج.په احتیاط سره سپرناټینټ لرې کړئ (80-90٪).هیڅکله منځنۍ طبقې ته مه ورشئ.د عکس العمل مساوي حجم په فینول/کلوروفارم کې اضافه کیدی شي او سپرناټینټ لرې کیږي.د حاصلاتو د ښه کولو لپاره دوه سپرناټینټ د نیوکلیک اسید باران لپاره یوځای مخلوط کیدی شي.د مخلوط کولو په وخت کې ډیر نرم مه کوئ، او هڅه مه کوئ چې ټول سپرناټینټ لرې کړئ.

2. د 70-80٪ ایتانول سره مینځل: د مینځلو پرمهال، نیوکلیک اسید باید وځنډول شي ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې پاتې مالګه مینځل کیږي.په ورته وخت کې، د ایتانول له مینځلو سمدستي وروسته، د څو ثانیو لپاره په لوړ سرعت سینټرفیوج کړئ، او بیا د پایپټ سره پاتې ایتانول لرې کړئ.د خونې په حرارت کې د 5-10 دقیقو لپاره ودریدو وروسته حل کړئ.

11. د ځانګړو موسسو استخراج

1. فایبروس نسج: د فایبر نسج څخه د RNA د استخراج کلیدي لکه د زړه / کنکال عضلات په بشپړ ډول د نسج ګډوډ کول دي.دا نسجونه د حجرو کم کثافت لري، نو د نسج په هر واحد وزن کې د RNA اندازه کمه ده، او دا غوره ده چې د امکان تر حده د پیل مقدار څخه کار واخلئ.ډاډ ترلاسه کړئ چې نسج د یخنۍ شرایطو لاندې په ښه توګه پیس کړئ.

2. هغه نسجونه چې لوړ پروټین/ غوړ مواد لري: د مغز/ سبزیجاتو غوړ مواد ډیر دي.د PCI استخراج وروسته، سپرناټینټ سپین فلوکولس لري.سوپرناټینټ باید د کلوروفارم سره بیا راوباسي.

3. هغه نسجونه چې لوړ نیوکلیک اسید/ریبوزیم مواد لري: سپلین/تایموس لوړ نیوکلیک اسید او ریبوزیم مواد لري.د یخنۍ شرایطو لاندې د نسج پیسول او د ګړندي همغږي کیدو سره کولی شي په مؤثره توګه ریبوزیمونه غیر فعال کړي.په هرصورت، که چیرې لیسټیټ ډیر ویسکوس وي (د لوړ نیوکلیک اسید مینځپانګې له امله)، د PCI استخراج به په اغیزمنه توګه د سټراټیټ کولو توان ونلري؛د لازیات اضافه کول کولی شي دا مسله حل کړي.ډیری PCI استخراج کولی شي ډیر پاتې DNA لرې کړي.که چیرې د الکول اضافه کولو وروسته سمدلاسه سپینه ورق جوړ شي، دا د DNA ککړتیا په ګوته کوي.له تحلیل وروسته د تیزابي PCI سره بیا استخراج کولی شي د DNA ککړتیا لرې کړي.

4. د نبات نسج: د نبات نسج د حیوانی نسج په پرتله ډیر پیچلی دی.په عموم ډول، نباتات د مایع نایتروجن شرایطو لاندې ځمکی دی، نو د Endogenous انزایمونو لخوا د RNA تخریب غیر معمولی دی.که د تخریب ستونزه حل نه شي، دا تقریبا یقینا په نمونه کې د ناپاکۍ له امله رامنځته کیږي.په ډیری نباتاتو کې موجود ناپاکۍ به د پاتې شونو لامل شي، او د پاتې شونو لامل اکثرا دا وي چې دا ناپاکۍ د RNA سره یو څه ورته والی لري: تاسو پریپیټیټ او زه پریپیټیټ، او تاسو جذبوي او زه جذبوم.دا ځانګړتیاوې مشخصوي چې دوی خورا پیاوړي انزایم مخنیوی کونکي دي.

په اوس وخت کې، سوداګریز RNA استخراج ریجنټونه د کوچنیو تعدیلاتو سره نږدې ټولو څارویو نسجونو سره تطابق کیدی شي، مګر لږ سوداګریز RNA استخراج ریجنټونه شتون لري چې د ډیری نبات نسجونو لپاره مناسب کیدی شي.خوشبختانه، فارجین کولی شي ځانګړي چمتو کړيد نبات RNA استخراج کټونه، مونږیۍ لرود نبات ټول RNA جلا کولو کټ, د نبات ټول RNA جلا کولو کټ پلس.وروستنۍ په ځانګړې توګه د هغو نباتاتو لپاره ډیزاین شوی چې لوړ پولیساکریډ او پولیفینول مواد لري.د RNA استخراج لپاره، د لابراتوار کاروونکو نظرونه په ځانګړې توګه ښه دي.

12. د نمونې د یخولو او پړسوب اغیزې منجمد نمونه کیدای شي لوی وي، او د RNA استخراج لپاره د کارولو دمخه باید پرې شي.نمونې د پرې کولو په وخت کې منحل کیږي (احتمالاً په جزوي توګه).منجمد نمونې ممکن د RNA استخراج دمخه وزن ته اړتیا ولري، او د دې پروسې په جریان کې به خامخا پړسوب واقع شي.ځینې ​​​​وختونه، د نمونې پړسوب هم د مایع نایتروجن ملنګ پروسې په جریان کې پیښیږي؛یا منجمد نمونه په مستقیم ډول د مایع نایتروجن ملنګ پرته په لیسټ کې اضافه کیږي، او پړسوب به د بشپړ هوموجنیزیشن دمخه واقع شي.تجربو ښودلې چې منجمد نسج د تازه نسجونو په پرتله د تودوخې په وخت کې د RNA تخریب ډیر خطر لري.احتمالي دلیل: د یخ وهلو پروسه د حجرو دننه جوړښتونه ګډوډوي، د Endogenous انزایمونو لپاره دا اسانه کوي چې د RNA سره مستقیم تماس کې راشي.

13. د RNA کیفیت قضاوت معمولا، الیکٹروفورسیس د RNA بشپړتیا قضاوت کولو لپاره کارول کیږي، او A260/A280 د RNA د پاکوالي قضاوت لپاره کارول کیږي.په تیوري کې، ثابت RNA د 28S:18S = 2.7:1 تناسب لري، او ډیری ډاټا د 28S:18S = 2:1 په تناسب ټینګار کوي.حقیقت دا دی چې تقریبا هیڅ RNA د حجرو پرته له نمونو څخه استخراج شوي د 2: 1 تناسب کې ندي (دا د Agilent Bioanalyzer په کارولو سره ترلاسه شوي).

د RNA الیکٹروفورسیس پایلې د ډیری فکتورونو لخوا اغیزمن کیږي، پشمول د ثانوي جوړښت، د الیکٹروفورسس شرایط، د نمونې بار، د EB لخوا د سنتریت درجې، او داسې نور. د RNA کشف کولو لپاره اصلي الیکٹروفورسیس وکاروئ او د DNA مارکر د کنټرول په توګه وکاروئ.که چیرې 28S په 2kb کې او 18S په 0.9kb کې روښانه وي، او 28S: 18S> 1، بشپړتیا کولی شي د ډیرو راتلونکو تجربو اړتیاوې پوره کړي.

A260/A280 یو شاخص دی چې د ډیری ګډوډۍ لامل شوی.تر ټولو لومړی، دا اړینه ده چې د نیوکلیک اسیدونو لپاره د دې شاخص اصلي معنی روښانه کړئ: خالص RNA، د هغې A260/280 = شاوخوا 2.0.خالص RNA 'سبب' دی او A260/A280 = 2 'اثر' دی.اوس هرڅوک A260/A280 د 'سبب' په توګه کاروي، فکر کوي چې "که A260/A280 = 2 وي، نو RNA خالص دی"، چې په طبیعي توګه د ګډوډۍ لامل کیږي.

که تاسو لیوالتیا لرئ، تاسو کولی شئ یو کوچنی ریجنټ اضافه کړئ چې ډیری وختونه په استخراج کې کارول کیږي، لکه فینول، ګیانیډین اسوتیوسایټ، PEG، او نور ستاسو د RNA نمونې ته، او بیا د A260/A280 تناسب اندازه کړئ.حقیقت دا دی چې ډیری ریجنټونه چې د RNA استخراج لپاره کارول کیږي، او همدارنګه په نمونه کې ډیری ناپاکۍ، شاوخوا A260 او A280 جذبوي، چې A260/A280 اغیزه کوي.

په اوس وخت کې ترټولو ښوونیزه طریقه د RNA نمونې د 200-300 nm رینج کې سکین کول دي.د خالص RNA وکر لاندې ځانګړنې لري: منحنی مسیر دی، A230 او A260 دوه انفلیکشن ټکي دي، A300 0 ته نږدې دی، A260/A280 = شاوخوا 2.0، او A260/A230 = شاوخوا 2.0.که چیرې د سکین ډاټا شتون ونلري، د A260/A230 تناسب باید هم وټاکل شي، ځکه چې دا تناسب د ټولو ناپاکۍ لیږد لپاره خورا حساس دی چې د انزایمیک غبرګون اغیزه کوي.د وسیلې خطي سلسله په پام کې ونیسئ (0.1-0.5 د A260 لپاره).

دوه نورې ګټورې پیښې شتون لري: نسبت به د 0.3 په اړه ټیټ وي کله چې A260/A280 په اوبو کې اندازه کیږي؛پداسې حال کې چې په 10 mm EDTA کې اندازه شوی نسبت د 1 mm EDTA په پرتله 0.2 لوړ دی.

اړوند توليدات:

د چین د نبات ټولټال RNA جلا کولو کټ جوړونکی او عرضه کونکی |Foregene (foreivd.com)

د RNA جلا کولو لړۍ عرضه کونکي او فابریکه |د چین RNA جلا کولو لړۍ جوړونکي (foreivd.com)

د RNA د جلا کولو لړۍ – Foregene Co., Ltd (foreivd.com)