د ستونزو تحلیل لارښود

لاندې د هغو ستونزو تحلیل چې تاسو ورسره مخ شئد نبات مجموعهRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

د سپن کالم تړل شوی دی

د سپن کالم بندیدل به د دې لامل شي چې د RNA حاصل کم شي یا حتی د RNA ترلاسه کولو لپاره پاک نشي، او د ترلاسه شوي RNA کیفیت به ټیټ وي.

د عام لامل تحلیل:

1. نمونه په بشپړه توګه نه ماتیږي.

د نمونې نیمګړتیاوې کولی شي د DNA پاکولو کالم بند کړي، کوم چې کولی شي د RNA حاصل او کیفیت هم اغیزمن کړي.موږ سپارښتنه کوو کله چې د نمونې ټوټې کولو ترسره کول، ژر تر ژره په کافي اندازه مایع نایتروجن سره وخورئ ترڅو نسجونه لکه د حجرو دیوالونه او د نمونو د حجرو غشا مات شي.د پولیفینول پولی سیکرایډونو نبات نمونو لپاره، موږ سپارښتنه کوو چې تاسو د نبات ټول RNA جلا کولو کټ پلس وکاروئ.

2. د DNA - پاکولو کالم جلا شوي سپرناټینټ جذب کړئ، د ممکنه حجرو کثافاتو ګولۍ جذب کړئ.

د آر این اے د جذب کولو پروسیجرونو په جریان کې د حجرو د خړوبولو مرغۍ مرغۍ کولی شي یوازې د RNA کالم بند کړي (د کړنالرې 5 ګام وګورئ، د پولیساکرایډ پولیفینول پروسې 6 ګام).موږ وړاندیز کوو چې د دې سپرناټینټ په تمه کولو کې باید پاملرنه وشي ترڅو د حجرو کثافاتو څخه مخنیوی وشي.

3. د نمونې لومړنی مقدار خورا لوی دی.

د نمونې ډیر کارول به د بفر PRL1 یا Buffer PSL1 لخوا د نمونو نیمګړتیا یا د حجرو نیمګړتیا لامل شي ، چې په پایله کې به د پاکولو عملیاتو لپاره د پاکولو کالم بند شي.د نبات ټول RNA جلا کولو کټ د عملیات شوي نمونې په هر واحد پاکولو کې 50 ملی ګرامه لومړني اعظمي لري.د پولیفینول پولی سیکرایډونو نبات نمونو لپاره، موږ وړاندیز کوو چې تاسو د نبات ټول RNA جلا کولو کټ پلس هڅه وکړئ.

4. د سینټرفیوج د حرارت درجه ډیره ټیټه ده.

د RNA بشپړ جلا کول او پاکول پرته له دې چې د نمونې نسج د مایع نایتروجن ګډوډۍ څخه پرته، ټول ګامونه د خونې د حرارت درجه (20-25 °C) کې ترسره کیږي.ځینې ​​ټیټې تودوخې سنټرفیوژونه د تودوخې درجه د 20 سانتي ګراد څخه ښکته وي، کوم چې کولی شي د DNA-پاک کولو کالم او/یا RNA-یوازې کالم کې خنډ رامنځته کړي.که دا پیښ شي، د سینټریفیوج تودوخه 20-25 °C ته وټاکئ او د لیسیز مخلوط او/یا د ایتانول جلا کولو سوپرناټینټ 37 °C ته پری ګرم کړئ.

هیڅ RNA استخراج شوی یا د RNA حاصل کم دی

معمولا ډیری فکتورونه شتون لري چې د بیا رغونې موثریت اغیزه کوي، لکه: نمونه د RNA منځپانګې، د عملیاتو طریقه، د ایولوشن حجم، او داسې نور.

د عامو لاملونو تحلیل په لاندې ډول:

1. د یخ حمام یا ټیټ تودوخې (4 درجې C) سینټرفیوګریشن د عملیاتو په جریان کې ترسره شو.

وړاندیز: په ټوله پروسه کې د خونې د تودوخې (15-25 ° C) کې کار وکړئ، د یخ حمام او د ټیټ تودوخې سینټرفیوګیشن مه کوئ.

       2.RNA د نمونې د ناسمې ساتنې یا د نمونې د اوږدې مودې ساتنې له امله تخریب شوی.

سپارښتنه: تازه راټول شوي نمونې باید ژر تر ژره په مایع نایتروجن کې کنګل شي، او بیا د اوږدې مودې لپاره په -80 ° C کې زیرمه شي، د نمونو د تکرار او یخولو څخه ډډه وکړئ؛یا سمدلاسه نمونې د RNA سټیبلائزر RNAlater محلول (حیواناتو نمونې) کې ډوب کړئ.

       3.د نمونې ناکافي ټوټه ټوټه کول او لیسز د پاکولو کالم د بندیدو لامل کیږي.

وړاندیز: کله چې نسج پیس کړئ، مهرباني وکړئ ډاډ ترلاسه کړئ چې نسج په کافي اندازه ځمکه ده، او ژر تر ژره یې مخکې چمتو شوي بفر PSL1 ته انتقال کړئ (تایید کړئ چې د β-ME سمه تناسب اضافه شوی، د طرزالعمل 1 ګام وګورئ).

4. په غلطه توګه الیونټ اضافه شوی.

وړاندیز: ډاډ ترلاسه کړئ چې RNase-Free ddH₂O د پاکولو کالم جھلی په مینځ کې څاڅکی دی.

5. د مطلق ایتانول صحیح حجم په بفر PSL2 یا بفر PRW2 کې ندی اضافه شوی.

وړاندیز: مهرباني وکړئ لارښوونې تعقیب کړئ، د بفر PSL2 او بفر PRW2 کې د مطلق ایتانول صحیح حجم اضافه کړئ او د کټ کارولو دمخه ښه مخلوط کړئ.

6. د نسج نمونې اندازه نامناسب ده.

وړاندیز: د بفر PSL1 په هر 500 μl کې 50 ملی ګرامه نسج وکاروئ.د ډیرو نسجونو کارول به د استخراج شوي RNA مقدار کم کړي او د RNA په پایله کې پاکوالی به هم کم شي.موږ په کلکه سپارښتنه کوو چې د لومړني نمونې دوز باید په هر RNA استخراج عملیاتو کې له 50 ملی ګرام څخه ډیر نه وي.

7. نامناسب اخراج حجم یا نیمګړتیا.

وړاندیز: د پاکولو کالم الیونټ حجم 50-200 μl دی؛که د elution اغیز د قناعت وړ نه وي، نو سپارښتنه کیږي چې وخت د خونې په حرارت کې د مخکې ګرم RNase-Free ddH اضافه کولو وروسته وغزول شي.₂O، لکه 5-10min.

8. د پاکولو کالم د بفر PRW2 سره مینځل وروسته د ایتانول پاتې شوني لري.

   وړاندیز: که خالي ټیوب د 1 دقیقو لپاره سینټرفیوګ شي او په بفر PRW2 کې د مینځلو وروسته لاهم ایتانول پاتې وي ، تاسو کولی شئ د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن وخت 2 دقیقو ته لوړ کړئ ، یا د پاکولو کالم د 5 دقیقو لپاره د خونې په حرارت درجه کې ځای په ځای کړئ ترڅو پاتې ایتانول په بشپړ ډول لرې شي.

9. کټ په غلطه توګه کارول شوی.

   وړاندیز: د پولیفینولیک پولی سیکرایډونو د نبات نمونو لپاره، د عام کټونو کارول لکه د نبات ټول RNA جلا کولو کټ ممکن د مثالي RNA نمونې ترلاسه کولو توان ونلري.موږ تاسو ته وړاندیز کوو چې د Plant Total RNA IsolationKit Plus وکاروئ ، کوم چې په ځانګړي ډول د پولیفینول پولیساکریډ نبات نمونو لپاره ډیزاین شوی.یو کټ په ځانګړي ډول د پولیفینول او پولیساکریډ نبات نمونو څخه د RNA استخراج لپاره رامینځته شوی.

د OD260/OD280 ارزښت ټیټ دی

د ddH سره RNA elution₂O او د سپیکٹرو فوټومیټر لوستلو لپاره کارول کیږي د ټیټ OD260/OD280 ارزښتونو پایله لري.موږ د 10 mm Tris-HCl، pH 7.5 (د RNase-Free ddH پرځای) کارولو وړاندیز کوو₂د OD260/OD280 نسبتا درست ارزښتونو د ترلاسه کولو لپاره، د RNA غلظت او پاکولو ارزونه په 19 پاڼه کې وګورئ.

پاک شوی RNA تخریب شوی

د پاک شوي RNA کیفیت په فکتورونو پورې اړه لري لکه د نمونې ساتنه، د RNase ککړتیا، او لاسوهنه.

د عامو لاملونو تحلیل:

1. د نسجونو نمونې د راټولولو وروسته په وخت کې زیرمه شوي ندي.

    سپارښتنه: که د نسجونو نمونې د راټولولو وروسته په وخت کې ونه کارول شي، مهرباني وکړئ سمدلاسه یې په مایع نایټروجن کې په ټیټ حرارت کې ذخیره کړئ یا په مایع نایتروجن کې د چټک کنګل کیدو وروسته د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره -80 ° C ته انتقال کړئ، یا سمدلاسه نمونې د RNA سټیبلائزر RNAlater محلول (حیواناتو نمونې) کې ډوب کړئ.د RNA استخراج لپاره، هڅه وکړئ چې د تازه راټول شوي نسج نمونې وکاروئ.

2. د نسجونو د نمونو تکرار او یخ کول.

   وړاندیز: کله چې د نسجونو نمونې ذخیره کړئ، دا غوره ده چې د ساتنې لپاره یې په کوچنیو ټوټو وویشئ، او د کارولو په وخت کې یې یوه برخه واخلئ ترڅو د نمونو د بار بار یخولو او پړسوب له امله د RNA تخریب مخه ونیول شي.

3.RNase د عملیاتو په خونه کې معرفي کیږي یا نه اغوستل کیدونکي دستکشې ، ماسکونه او داسې نور.

   وړاندیز: د RNA استخراج تجربې په جلا RNA عملیاتو کې غوره ترسره کیږي ، او د لابراتوار میز باید د تجربې دمخه پاک شي ، او د تجربې په جریان کې د ضایع کیدو وړ دستکشې او ماسکونه باید اغوستل شي ترڅو د RNA تخریب مخه ونیول شي چې د RNase معرفي کیدو له امله رامینځته کیږي.

4. ریجنټ د کارولو پرمهال د RNase لخوا ککړ شوی.

   وړاندیز: د اړوندو تجربو لپاره د نبات ټول RNA استخراج کټونو نوې لړۍ سره بدل کړئ.

5. د سینټرفیوج ټیوبونه او پایپټ لارښوونې چې د RNA لاسوهنې لپاره کارول کیږي د RNase سره ککړ شوي دي.

وړاندیز: ډاډ ترلاسه کړئ چې د سینټرفیوج ټیوبونه، د پایپټ لارښوونې، پایپټ او نور د RNA استخراج کې کارول کیږي ټول د RNase څخه پاک دي.

لارښود لارښود:

د نبات ټول RNA جلا کولو کټ لارښوونې لارښود