د سیل مستقیم RT qPCR کټ - SYBR GREEN I مستقیم سیل لیسز سیل چمتو یو ګام qRT-PCR کټونه
توضیحات
دا کټ یو ځانګړی لیسیز بفر سیسټم کاروي چې کولی شي په چټکۍ سره د RT-qPCR عکس العملونو لپاره د کلتور شوي حجرو نمونو څخه RNA خوشې کړي، په دې توګه د وخت مصرف او د RNA پاکولو پروسه له منځه یوسي.د RNA ټیمپلیټ یوازې په 7 دقیقو کې ترلاسه کیدی شي.د 5×مستقیم RT مکس او 2×د کټ لخوا چمتو شوي مستقیم qPCR مکس-SYBR ریجنټونه کولی شي په چټکه او مؤثره توګه د ریښتیني وخت کمیتي PCR پایلې ترلاسه کړي.
5×مستقیم RT مکس او 2×مستقیم qPCR مکس-SYBR قوي مخنیوی زغم لري، او د نمونو lysate په مستقیم ډول د RT-qPCR لپاره د نمونې په توګه کارول کیدی شي.دا کټ یو ځانګړی RNA لوړ تړاو لري Foregene reverse transscriptase، او Hot D-Taq DNA پولیمریز، dNTPs، MgCl.2د غبرګون بفر، د PCR اصلاح کوونکی او ثبات ورکوونکی.
مشخصات
۲۰۰×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns
د کټ اجزا
| لومړۍ برخه | بفر CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| بفر ST | |
| دویمه برخه | د DNA پاکونکی |
| 5× مستقیم RT مخلوط | |
| 2× مستقیم qPCR مکس-SYBR | |
| 50× ROX حواله رنګ | |
| RNase وړیا ddH2O | |
| لارښوونې | |
ځانګړتیاوې او ګټې
■ساده او اغیزمن: د سیل مستقیم RT ټیکنالوژۍ سره، د RNA نمونې یوازې په 7 دقیقو کې ترلاسه کیدی شي.
■ د نمونې غوښتنه لږه ده، د 10 حجرو په څیر ټیټه ازموینه کیدی شي.
■ لوړ تولید: دا کولی شي په چټکۍ سره په 384، 96، 24، 12، 6 څاه پلیټونو کې کلتور شوي حجرو کې RNA کشف کړي.
■ د DNA ایریزر کولی شي په چټکۍ سره خوشې شوي جینومونه لرې کړي، په راتلونکو تجربوي پایلو اغیزه خورا کمه کړي.
■ اصلاح شوی RT او qPCR سیسټم دوه مرحلې RT-PCR ریورس لیږد ډیر اغیزمن او PCR ډیر مشخص کوي، او د RT-qPCR غبرګون مخنیوی کونکو ته ډیر مقاومت لري.
د کټ غوښتنلیک
د غوښتنلیک ساحه: کلتور شوي حجرې.
- RNA د نمونې لیسز لخوا خپور شوی: یوازې د دې کټ RT-qPCR ټیمپلیټ لپاره پلي کیږي.
- کټ د لاندې موخو لپاره کارول کیدی شي: د جین بیان تحلیل، د siRNA منځګړیتوب د جین خاموش کولو اغیز تایید، د مخدره توکو سکرینینګ، او داسې نور.
ډياګرام
د ذخیره کولو او شیلف ژوند
د دې کټ لومړۍ برخه باید په 4 ℃ کې زیرمه شي؛دویمه برخه باید په -20 ℃ کې زیرمه شي.
Foregene Protease Plus II باید په 4 کې زیرمه شي℃، په -20 ℃ کې یخ مه کوئ.
Reagent 2×مستقیم qPCR مکس-SYBR باید په -20 کې زیرمه شي℃په تیاره کې؛که په مکرر ډول وکارول شي ، دا په 4 کې هم زیرمه کیدی شي℃ د لنډ مهاله ذخیره کولو لپاره (د 10 ورځو دننه وکاروئ).
د ریښتیني وخت PCR پریمر ډیزاین اصول
فارورډ پریمر او ریورس پریمر
د ریښتیني وخت PCR لپاره ، د پریمر ډیزاین خورا مهم دی.پریمرونه د PCR امپلیفیکیشن ځانګړتیا او موثریت پورې اړه لري، او د لاندې اصولو په حواله ډیزاین کیدی شي:
د پریمر اوږدوالی: 18-30bp.
د GC منځپانګه: 40-60٪.
د Tm ارزښت: د پریمر ډیزاین سافټویر، لکه پریمر 5، کولی شي د پریمر د Tm ارزښت ورکړي.د پورته او ښکته پرائمرونو Tm ارزښتونه باید د امکان تر حده نږدې وي.د Tm د محاسبې فورمول هم کارول کیدی شي: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).کله چې د PCR ترسره کول، د پریمر Tm ارزښت 5 °C څخه ښکته تودوخه عموما د انیل کولو تودوخې په توګه غوره کیږي (د انیل کولو تودوخې ورته زیاتوالی کولی شي د PCR عکس العمل ځانګړتیا زیاته کړي).
پرائمر او PCR محصولات:
ډیزاین پریمر PCR امپلیفیکیشن محصول اوږدوالی په غوره توګه 100-150bp دی.
د نمونې په ثانوي ساختماني ساحه کې ډیزاین پریمر باید د امکان تر حده مخنیوی وشي.
د پورته او ښکته پرائمرونو د 3′ پایونو تر مینځ د 2 یا ډیرو تکمیلي اډو د جوړولو څخه مخنیوی وکړئ.
پریمر 3′ ترمینل بیس د 3 اضافي پرله پسې G یا C سره شتون نلري.
پرائمرونه پخپله نشي کولی تکمیلي جوړښتونه ولري، که نه نو د ویښتو پین جوړښت به رامینځته شي چې د PCR امپلیفیکیشن اغیزه کوي.
ATCG باید د پریمر په ترتیب کې د امکان تر حده په مساوي ډول وویشل شي، او د 3′ ترمینل بیس باید د T په څیر مخنیوی وشي.
ضمیمه 1: د سیل مستقیم RT-qPCR کټ اجزا ضمیمه کڅوړه
1.د سیل لیسز حل
|
| |||
| د کټ اجزا (24 څاه لیسیز سیسټم / څاه) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ټ | ۵۰۰ ټ | ||
| برخهزه | بفر CL | 20 ملی لیتر | 100 ملی لیتر |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ملی × 2 | |
| بفر ST | 1 ملی × 2 | 10 ملی لیتر | |
| برخهII | د DNA پاکونکی | 400 μl | 1 ملی × 2 |
2.RT مخلوط
|
| |
| د کټ اجزا (20 μl غبرګون سیسټم) | DRT-01011-B1 |
| 200 ټ | |
| 5× مستقیم RT مخلوط | 800 μl |
| د RNase وړیا ddH2O | 1.7 ملی × 2 |
|
| ||
| د کټ اجزا (20 μl غبرګون سیسټم) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 ټ | 1000 ټ | |
| 2× مستقیم qPCR مکس-SYBR | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی × 6 |
| 50× ROX حواله رنګ | 40 μl | 200 μl |
| د RNase وړیا ddH2O | 1.7 ملی لیتر | 10 ملی لیتر |
لارښود لارښود:
