(96-ښه) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR کټ – SYBR شنه I
توضیحات
د(96-ښه) QuickEasyTM د سیل مستقیم RT-qPCR کټ–SYBR شنه Iبرابرويیو ځانګړی لیسیس بفر سیسټمto ژر تر ژره RNA خوشې کړئد کلتوري حجرو څخهد RT-qPCR عکس العملونو لپاره نمونې، د وخت ضایع کول له منځه یوسيد RNA پاکولو پروسه، او یوازې 7 دقیقې وخت نیسي ترڅو اړین RNA ټیمپلیټ ترلاسه کړي.د5× مستقیم RT مخلوطاو2× مستقیم qPCR مکس-SYBRپه بکس کې چمتو کیدی شي ګړندي اوپه مؤثره توګه د ریښتیني وخت مقدار ترلاسه کولد PCR پایلې.
5× Direct RT Mix او 2× Direct qPCR Mix-SYBR د قوي مخنیوی زغم لري، او کولی شي د نمونې lysate څخه کار واخلي ترڅو د اغیزمن ریورس لیږد او ځانګړي امپلیفیکیشن لپاره د نمونې په توګه ازموینه وشي.ریاجنټ د RNA سره د لوړ تړاو سره د فورجین ځانګړي ریورس ټرانسکریپټیس لري، او همدارنګه د ګرم D-Taq DNA پولیمیریز، dNTPs، MgCl2 ، د عکس العمل بفر ، د PCR اصلاح کونکی او ثبات کونکی ، او د لیسز بفر سره په ګډه کارول کیدی شي ترڅو نمونه ګړندي ، په اسانۍ او دقیق ډول کشف کړي ، او دا د لوړ حساسیت ، قوي ځانګړتیا او ښه ثبات ځانګړتیاوې لري.
دا کټ د 96 - ښه کلتور شوي حجرو مایکرو سیسټم لیز کولو لپاره دی، او ښه یونیفارم او ثبات لري؛د کټ اجزا د 96 lysis تعاملات، 96 ریورس لیږد عکس العملونه او 96 × 2 qPCR تعاملات وړاندې کوي، کوم چې کولی شي د 96-څاه حجرو پلیټ د یو ځل کارولو لپاره پوره کړي، د ککړتیا څخه مخنیوی کوي چې د ریجنټونو د تکرار پرانستلو، یخولو او پړسیدلو او د ریجنټ فعالیت تخریب له امله رامینځته کیږي.
د کټ اجزا
| د کټ ترکیب ( 50 μد لیسیز سیسټم/20 μLRT د غبرګون سیسټم / 20μد L qPCR غبرګون سیسټم) | DRT-03011 | تبصره | |
| 96T | |||
| برخهI | بفرCL | 5 ملی لیتر | حجرهلیسیس |
| فارجینپروټیز پلس II | 100 μL | ||
| بفرST | ۵۰۰ μL | ||
| برخه II | DNAپاکونکی | 100 μL | |
| 5× مستقیم RT مخلوط | ۴۰۰ μL | RT | |
| 2× مستقیم qPCR مخلوط-SYBR | ۱ مL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX حواله رنګ | 400µL | ||
| RNase- وړياddH2 O | 1.7 ملی لیتر |
| |
| Mکلنی | 1 ټوټه | 1 خدمت کول | |
*: د lysis reagent DNA Eraser د کټ په دویمه برخه کې شامل دي؛د سیل لیسیز، RT، او qPCR اجزا په جلا توګه اخیستل کیدی شي.
ځانګړتیاوې او ګټې
■ساده او اغیزمن: د سیل مستقیم RT ټیکنالوژۍ سره، د RNA نمونې یوازې په 7 دقیقو کې ترلاسه کیدی شي.
■ د نمونې غوښتنه لږه ده، د 10 حجرو په څیر ټیټه ازموینه کیدی شي.
■ لوړ تولید: دا کولی شي په چټکۍ سره په 384، 96، 24، 12، 6 څاه پلیټونو کې کلتور شوي حجرو کې RNA کشف کړي.
■ د DNA ایریزر کولی شي په چټکۍ سره خوشې شوي جینومونه لرې کړي، په راتلونکو تجربوي پایلو اغیزه خورا کمه کړي.
■ اصلاح شوی RT او qPCR سیسټم دوه مرحلې RT-PCR ریورس لیږد ډیر اغیزمن او PCR ډیر مشخص کوي، او د RT-qPCR غبرګون مخنیوی کونکو ته ډیر مقاومت لري.
د کټ غوښتنلیک
د غوښتنلیک ساحه: کلتور شوي حجرې.
- RNA د نمونې لیسز لخوا خپور شوی: یوازې د دې کټ RT-qPCR ټیمپلیټ لپاره پلي کیږي.
- کټ د لاندې موخو لپاره کارول کیدی شي: د جین بیان تحلیل، د siRNA منځګړیتوب د جین خاموش کولو اغیز تایید، د مخدره توکو سکرینینګ، او داسې نور.
د ذخیره کولو او شیلف ژوند
د دې کټ لومړۍ برخه باید په 4 کې زیرمه شي℃;دویمه برخه باید په -20 ℃ کې زیرمه شي.
Foregene Protease Plus II باید په 4 کې زیرمه شي℃، په -20 ℃ کې یخ مه کوئ.
Reagent 2×مستقیم qPCR مکس-تقمان باید په -20 کې زیرمه شي℃په تیاره کې؛که په مکرر ډول وکارول شي ، دا په 4 کې هم زیرمه کیدی شي℃ د لنډ مهاله ذخیره کولو لپاره (د 10 ورځو دننه وکاروئ).
د ریښتیني وخت PCR پریمر ډیزاین اصول
فارورډ پریمر او ریورس پریمر
د ریښتیني وخت PCR لپاره ، د پریمر ډیزاین خورا مهم دی.پریمرونه د PCR امپلیفیکیشن ځانګړتیا او موثریت پورې اړه لري، او د لاندې اصولو په حواله ډیزاین کیدی شي:
- د پریمر اوږدوالی: 18-30bp.
- د GC منځپانګه: 40-60٪.
- د Tm ارزښت: د پریمر ډیزاین سافټویر، لکه پریمر 5، کولی شي د پریمر د Tm ارزښت ورکړي.د پورته او ښکته پرائمرونو Tm ارزښتونه باید د امکان تر حده نږدې وي.د Tm د محاسبې فورمول هم کارول کیدی شي: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).کله چې د PCR ترسره کول، د پریمر Tm ارزښت 5 °C څخه ښکته تودوخه عموما د انیل کولو تودوخې په توګه غوره کیږي (د انیل کولو تودوخې ورته زیاتوالی کولی شي د PCR عکس العمل ځانګړتیا زیاته کړي).
- پرائمر او PCR محصولات:
- ډیزاین پریمر PCR امپلیفیکیشن محصول اوږدوالی په غوره توګه 100-150bp دی.
- د نمونې په ثانوي ساختماني ساحه کې ډیزاین پریمر باید د امکان تر حده مخنیوی وشي.
- د پورته او ښکته پرائمرونو د 3′ پایونو تر مینځ د 2 یا ډیرو تکمیلي اډو د جوړولو څخه مخنیوی وکړئ.
- پریمر 3′ ترمینل بیس د 3 اضافي پرله پسې G یا C سره شتون نلري.
- پرائمرونه پخپله نشي کولی تکمیلي جوړښتونه ولري، که نه نو د ویښتو پین جوړښت به رامینځته شي چې د PCR امپلیفیکیشن اغیزه کوي.
- ATCG باید د پریمر په ترتیب کې د امکان تر حده په مساوي ډول وویشل شي، او د 3′ ترمینل بیس باید د T په څیر مخنیوی وشي.
ضمیمه۱: سيell مستقیمRT-qPCR د کټ برخهد ضمیمه کڅوړه
1.Cell Lysis حل
| د سیل لیسز حل | |||
| د کټ اجزا (24 څاه لیسیز سیسټم / څاه) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ټ | ۵۰۰ ټ | ||
| برخهزه | بفر CL | 20 ملی لیتر | 100 ملی لیتر |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ملی × 2 | |
| بفر ST | 1 ملی × 2 | 10 ملی لیتر | |
| برخهII | د DNA پاکونکی | 400 μl | 1 ملی × 2 |
| د RT مخلوط | |
| د کټ اجزا (20 μl غبرګون سیسټم) | DRT-01011-B1 |
| 200 ټ | |
| 5× مستقیم RT مخلوط | 800 μl |
| د RNase وړیا ddH2O | 1.7 ملی × 2 |
| د qPCR مخلوط | ||
| د کټ اجزا (20 μl غبرګون سیسټم) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ټ | 1000 ټ | |
| 2× مستقیم qPCR مکس-تقمان | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی × 6 |
| 20× ROX حواله رنګ | 40 μl | 200 μl |
| د RNase وړیا ddH2O | 1.7 ملی لیتر | 10 ملی لیتر |
لارښود لارښود:
