د حجرې مستقیم RT qPCR کټ-تقمان مستقیم سیل لیسز سیل چمتو یو ګام qRT-PCR کټس تحقیقات
توضیحات
دا محصول د RT-qPCR عکس العملونو لپاره د کلتور شوي حجرو نمونو څخه د RNA د ژر تر ژره خوشې کولو لپاره یو ځانګړی لیسیز بفر سیسټم کاروي، د RNA پاکولو وخت او ستونزمن بهیر له منځه یوسي، او یوازې 7 دقیقې د اړتیا وړ RNA ټیمپلیټ ترلاسه کولو لپاره، د 5x مستقیم RT مکس سره، 2 × مستقیم qPCR مکس - د ریښتیني وخت په واسطه چمتو شوي د ریښتیني-Tacientit-Tacientit-Tacientit-Taciant. پایلې
5× Direct RT Mix او 2× Direct qPCR Mix-Taqman قوي مخنیوی زغم لري او کولی شي د نمونې د لیسټیټ په کارولو سره د نمونې په توګه اندازه کولو لپاره په مؤثره توګه بیرته راګرځول او ځانګړي امپلیفیکیشن ترسره کړي.ریجنټ د فارجین ریورس ټرانسکریپټیس، ګرم D-Taq DNA پولیمریز، dNTPs، MgCl لري2، د عکس العمل بفر ، PCR اصلاح کونکی او سټیبلائزر ، کوم چې د لیسز بفر سره کارول کیدی شي ترڅو ګړندي او اسانه نمونې کشف کړي ، او د لوړ حساسیت ، ځانګړتیا او ثبات ځانګړتیاوې لري.
مشخصات
۲۰۰×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns
د کټ اجزا
| QuickEasyTMد سیل مستقیم RT-qPCR کټ-تقمان | ||||
| د کټ اجزا 20μl qPCR عکس العمل سیسټم | DRT-01021 | DRT-01022 | نوټ | |
| 200 ټ | 1000 ټ | |||
|
برخه I | بفر CL | 4 ملی لیتر | 20 ملی لیتر | د حجرو لیسز |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| بفر ST | 400 μl | 1 ملی × 2 | ||
|
برخه II | د DNA پاکونکی | 80 μl | 400 μl | |
| 5 × مستقیم RT مکس * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× مستقیم qPCR مکس-تقمان * | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی × 6 | qPCR | |
| 20×ROX حواله رنګ | 40 μl | 200 μl | ||
| د RNase وړیا ddH2O | 1.7 ملی لیتر | 10 ملی لیتر | ||
| د لارښوونې لارښود | 1 ټوټه | 1 ټوټه | ||
*:د سیل لیسیز، 5 × مستقیم RT مکس، 2 × مستقیم qPCR مکس-تقمان په جلا توګه اخیستل کیدی شي
ځانګړتیاوې او ګټې
■ساده او اغیزمن: د سیل مستقیم RT ټیکنالوژۍ سره، د RNA نمونې یوازې په 7 دقیقو کې ترلاسه کیدی شي.
■ د نمونې غوښتنه لږه ده، د 10 حجرو په څیر ټیټه ازموینه کیدی شي.
■ لوړ تولید: دا کولی شي په چټکۍ سره په 384، 96، 24، 12، 6 څاه پلیټونو کې کلتور شوي حجرو کې RNA کشف کړي.
■ د DNA ایریزر کولی شي په چټکۍ سره خوشې شوي جینومونه لرې کړي، په راتلونکو تجربوي پایلو اغیزه خورا کمه کړي.
■ اصلاح شوی RT او qPCR سیسټم دوه مرحلې RT-PCR ریورس لیږد ډیر اغیزمن او PCR ډیر مشخص کوي، او د RT-qPCR غبرګون مخنیوی کونکو ته ډیر مقاومت لري.
د کټ غوښتنلیک
د غوښتنلیک ساحه: کلتور شوي حجرې.
- RNA د نمونې لیسز لخوا خپور شوی: یوازې د دې کټ RT-qPCR ټیمپلیټ لپاره پلي کیږي.
- کټ د لاندې موخو لپاره کارول کیدی شي: د جین بیان تحلیل، د siRNA منځګړیتوب د جین خاموش کولو اغیز تایید، د مخدره توکو سکرینینګ، او داسې نور.
د ذخیره کولو او شیلف ژوند
د دې کټ لومړۍ برخه باید په 4 کې زیرمه شي℃;دویمه برخه باید په -20 ℃ کې زیرمه شي.
Foregene Protease Plus II باید په 4 کې زیرمه شي℃، په -20 ℃ کې یخ مه کوئ.
Reagent 2×مستقیم qPCR مکس-تقمان باید په -20 کې زیرمه شي℃په تیاره کې؛که په مکرر ډول وکارول شي ، دا په 4 کې هم زیرمه کیدی شي℃ د لنډ مهاله ذخیره کولو لپاره (د 10 ورځو دننه وکاروئ).
د ریښتیني وخت PCR پریمر ډیزاین اصول
فارورډ پریمر او ریورس پریمر
د ریښتیني وخت PCR لپاره ، د پریمر ډیزاین خورا مهم دی.پریمرونه د PCR امپلیفیکیشن ځانګړتیا او موثریت پورې اړه لري، او د لاندې اصولو په حواله ډیزاین کیدی شي:
- د پریمر اوږدوالی: 18-30bp.
- د GC منځپانګه: 40-60٪.
- د Tm ارزښت: د پریمر ډیزاین سافټویر، لکه پریمر 5، کولی شي د پریمر د Tm ارزښت ورکړي.د پورته او ښکته پرائمرونو Tm ارزښتونه باید د امکان تر حده نږدې وي.د Tm د محاسبې فورمول هم کارول کیدی شي: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).کله چې د PCR ترسره کول، د پریمر Tm ارزښت 5 °C څخه ښکته تودوخه عموما د انیل کولو تودوخې په توګه غوره کیږي (د انیل کولو تودوخې ورته زیاتوالی کولی شي د PCR عکس العمل ځانګړتیا زیاته کړي).
- پرائمر او PCR محصولات:
- ډیزاین پریمر PCR امپلیفیکیشن محصول اوږدوالی په غوره توګه 100-150bp دی.
- د نمونې په ثانوي ساختماني ساحه کې ډیزاین پریمر باید د امکان تر حده مخنیوی وشي.
- د پورته او ښکته پرائمرونو د 3′ پایونو تر مینځ د 2 یا ډیرو تکمیلي اډو د جوړولو څخه مخنیوی وکړئ.
- پریمر 3′ ترمینل بیس د 3 اضافي پرله پسې G یا C سره شتون نلري.
- پرائمرونه پخپله نشي کولی تکمیلي جوړښتونه ولري، که نه نو د ویښتو پین جوړښت به رامینځته شي چې د PCR امپلیفیکیشن اغیزه کوي.
- ATCG باید د پریمر په ترتیب کې د امکان تر حده په مساوي ډول وویشل شي، او د 3′ ترمینل بیس باید د T په څیر مخنیوی وشي.
ضمیمه۱: سيell مستقیمRT-qPCR د کټ برخهد ضمیمه کڅوړه
1.Cell Lysis حل
| د سیل لیسز حل | |||
| د کټ اجزا (24 څاه لیسیز سیسټم / څاه) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 ټ | ۵۰۰ ټ | ||
| برخهزه | بفر CL | 20 ملی لیتر | 100 ملی لیتر |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ملی × 2 | |
| بفر ST | 1 ملی × 2 | 10 ملی لیتر | |
| برخهII | د DNA پاکونکی | 400 μl | 1 ملی × 2 |
| د RT مخلوط | |
| د کټ اجزا (20 μl غبرګون سیسټم) | DRT-01011-B1 |
| 200 ټ | |
| 5× مستقیم RT مخلوط | 800 μl |
| د RNase وړیا ddH2O | 1.7 ملی × 2 |
| د qPCR مخلوط | ||
| د کټ اجزا (20 μl غبرګون سیسټم) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 ټ | 1000 ټ | |
| 2× مستقیم qPCR مکس-تقمان | 1 ملی × 2 | 1.7 ملی × 6 |
| 20× ROX حواله رنګ | 40 μl | 200 μl |
| د RNase وړیا ddH2O | 1.7 ملی لیتر | 10 ملی لیتر |
لارښود لارښود:
