موږ تجربه لرونکي جوړونکي یو.د لوی تخفیف چین لوړ حساسیت یو ګام تحقیقات Rt- لپاره د دې بازار مهم سندونو کې اکثریت ګټلQpcrکټ V2، کیفیت د فابریکې ژوند دی، د پیرودونکي غوښتنې باندې تمرکز د شرکت بقا او پرمختګ سرچینه ده، موږ د صداقت او ښه باور کاري چلند ته غاړه کیږدو، ستاسو راتګ ته سترګې په لار یو!
موږ تجربه لرونکي جوړونکي یو.د دې لپاره د بازار په مهمو سندونو کې اکثریت ګټلد چین تاک DNA پولیمریز, Qpcr، زموږ شرکت ژمنه کوي: مناسب نرخونه ، د تولید لنډ وخت او د پلور وروسته قناعت وړ خدمت ، موږ تاسو ته هم ښه راغلاست وایو چې هرکله چې وغواړئ زموږ فابریکې څخه لیدنه وکړئ.کاش چې اوس موږ په ګډه یو خوندور او اوږدمهاله سوداګرۍ ولرو !!!

توضیحات

دا کټ یو ځانګړی لیسیز بفر سیسټم کاروي چې کولی شي په چټکۍ سره د RT-qPCR عکس العملونو لپاره د کلتور شوي حجرو نمونو څخه RNA خوشې کړي، په دې توګه د وخت مصرف او د RNA پاکولو پروسه له منځه یوسي.د RNA ټیمپلیټ یوازې په 7 دقیقو کې ترلاسه کیدی شي.د کټ لخوا چمتو شوي 5 × مستقیم RT مکس او 2 × مستقیم qPCR مکس-SYBR ریجنټونه کولی شي په چټکه او مؤثره توګه د ریښتیني وخت کمیتي PCR پایلې ترلاسه کړي.

5×Direct RT Mix او 2×Direct qPCR Mix-SYBR قوي مخنیوی زغم لري، او د نمونو lysate په مستقیم ډول د RT-qPCR لپاره د نمونې په توګه کارول کیدی شي.دا کټ یو ځانګړی RNA لوړ تړاو لري Foregene reverse transscriptase، او Hot D-Taq DNA پولیمریز، dNTPs، MgCl.₂د غبرګون بفر، د PCR اصلاح کوونکی او ثبات ورکوونکی.

مشخصات

200×20μl Rxns، 1000×20μl Rxns

د کټ اجزا

ځانګړتیاوې او ګټې

■ ساده او مؤثره: د Cell Direct RT ټیکنالوژۍ سره، د RNA نمونې یوازې په 7 دقیقو کې ترلاسه کیدی شي.

■ د نمونې غوښتنه لږه ده، د 10 حجرو په څیر ټیټه ازموینه کیدی شي.

■ لوړ تولید: دا کولی شي په چټکۍ سره په 384، 96، 24، 12، 6 څاه پلیټونو کې کلتور شوي حجرو کې RNA کشف کړي.

■ د DNA ایریزر کولی شي په چټکۍ سره خوشې شوي جینومونه لرې کړي، په راتلونکو تجربوي پایلو اغیزه خورا کمه کړي.

■ اصلاح شوی RT او qPCR سیسټم دوه مرحلې RT-PCR ریورس لیږد ډیر اغیزمن او PCR ډیر مشخص کوي، او د RT-qPCR غبرګون مخنیوی کونکو ته ډیر مقاومت لري.

د کټ غوښتنلیک

د غوښتنلیک ساحه: کلتور شوي حجرې.

- RNA د نمونې لیسز لخوا خپور شوی: یوازې د دې کټ RT-qPCR ټیمپلیټ لپاره پلي کیږي.

- کټ د لاندې موخو لپاره کارول کیدی شي: د جین بیان تحلیل، د siRNA منځګړیتوب د جین خاموش کولو اغیز تایید، د مخدره توکو سکرینینګ، او داسې نور.

ډياګرام

د ذخیره کولو او شیلف ژوند

د دې کټ لومړۍ برخه باید په 4 ℃ کې زیرمه شي؛دویمه برخه باید په -20 ℃ کې زیرمه شي.

Foregene Protease Plus II باید په 4 ℃ کې زیرمه شي، په -20 ℃ کې یخ مه کوئ.

Reagent 2×Direct qPCR Mix-SYBR باید په تیاره کې -20℃ کې زیرمه شي.که په مکرر ډول وکارول شي ، دا هم د لنډ مهاله ذخیره کولو لپاره په 4℃ کې زیرمه کیدی شي (د 10 ورځو دننه وکاروئ).Wining the majority of the crucial certifications of its market for Big discounting China High Sensitivity One-Step Probe Rt-Qpcr Kit V2 , کیفیت د فابریکې ژوند دی , د پیرودونکي غوښتنې باندې تمرکز د شرکت بقا او پرمختګ سرچینه ده , We adhere to honesty and good faith working attitude, looking forward to your comes!
لوی تخفیفد چین تاک DNA پولیمریز، Qpcr ، زموږ شرکت ژمنه کوي: مناسب قیمتونه ، د تولید لنډ وخت او د پلور وروسته د قناعت وړ خدمت ، موږ تاسو ته هم ښه راغلاست وایو هرکله چې تاسو غواړئ زموږ فابریکې څخه لیدنه وکړئ.کاش چې اوس موږ په ګډه یو خوندور او اوږدمهاله سوداګرۍ ولرو !!!

QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit -تقمan

Cat.No.DRT-01021/01022

د حجرو مستقیم RT-qPCR لپاره د ≤ 1000,000 حجرو په کارولو سره

د محصول پیژندنه

دا محصول د RT-qPCR عکس العملونو لپاره د کلتور شوي حجرو نمونو څخه د RNA د ژر تر ژره خوشې کولو لپاره یو ځانګړی لیسیز بفر سیسټم کاروي، د RNA پاکولو وخت او ستونزمن بهیر له منځه یوسي، او یوازې 7 دقیقې د اړتیا وړ RNA ټیمپلیټ ترلاسه کولو لپاره، د 5x مستقیم RT مکس سره، 2 × مستقیم qPCR مکس - د ریښتیني وخت په واسطه چمتو شوي د ریښتیني-Tacientit-Tacientit-Tacientit-Taciant. پایلې

5× Direct RT Mix او 2× Direct qPCR Mix-Taqman قوي مخنیوی زغم لري او کولی شي د نمونې د لیسټیټ په کارولو سره د نمونې په توګه اندازه کولو لپاره په مؤثره توګه بیرته راګرځول او ځانګړي امپلیفیکیشن ترسره کړي.ریجنټ د فارجین ریورس ټرانسکریپټیس، ګرم D-Taq DNA پولیمریز، dNTPs، MgCl لري₂، د عکس العمل بفر ، PCR اصلاح کونکی او سټیبلائزر ، کوم چې د لیسز بفر سره کارول کیدی شي ترڅو ګړندي او اسانه نمونې کشف کړي ، او د لوړ حساسیت ، ځانګړتیا او ثبات ځانګړتیاوې لري.

د تولیداتو ځانګړتیاوی

ساده، اغیزمن Cell Direct RT ټیکنالوژي چې د RNA نمونو ترلاسه کولو لپاره لږ تر لږه 7 دقیقې وخت نیسي.

د نمونې اړتیاوې کوچنۍ دي، او لږترلږه 10 کلتور شوي حجرې د تجربې لپاره کارول کیدی شي.

د کرل شوي حجرو لکه 384، 96، 24، 12، او 6 څاه پلیټونو د چټک RNA استملاک لپاره لوړ انډول.

د DNA ایریزر د دې وړتیا لري چې ژر تر ژره خوشې شوي جینومونه لرې کړي، په راتلونکو تجربوي پایلو باندې اغیز خورا کموي.

اصلاح شوي RT او qPCR سیسټمونه دوه مرحلې RT-PCR د ډیر اغیزمن ریورس لیږد ، ځانګړتیا او قوي RT-qPCR عکس العمل مخنیوی برداشت سره فعالوي.

د کټ غوښتنلیک

د غوښتنلیک ساحه: کلتوري حجرې.

د نمونې lysis تشریح شوي RNA: یوازې د دوه مرحلې RT-qPCR ټیمپلیټ په توګه کارول کیږي.

کټونه د لاندې موخو لپاره کارول کیدی شي: د جین تنظیمي بیان تحلیل، د ایلیل ازموینه، د مخدره توکو سکرینینګ، او داسې نور.

د کټ محدودیتونه

پراخ شوي ټوټې ≤ 300 bp.

کټونه د تازه کولتور حجرو لپاره کارول کیږي.

د محصول کیفیت کنټرول

د FOREGENE د ټول کیفیت مدیریت سیسټم په وینا، د Cell Direct RT-qPCR لړۍ کټونو هره بسته په سختۍ سره څو ځله ازمول کیږي ترڅو د کټونو د هرې بستې کیفیت اعتبار او ثبات ډاډمن کړي.

د کټ منځپانګې

*:د سیل لیسیز، 5×مستقیم RT مکس، 2× مستقیم qPCR مکس-تقمان په جلا توګه اخیستل کیدی شي، توضیحات په ضمیمه 1 (13 پاڼه) کې وړاندې شوي.

د ذخیره کولو شرایط

1. د بار وړلو شرایط

د ټیټ تودوخې د آیس پیک بکس ټرانسپورټ ټوله پروسه ، ترڅو ډاډ ترلاسه شي چې کټ په <4 ° C حالت کې دی.

2. د ذخیره کولو شرایط

لومړۍ برخه په 4 درجو او دوهمه برخه په -20 درجو کې ذخیره کړئ.

Foregene Protease Plus II باید په 4°C کې زیرمه شي، په -20°C کې منجمد نه وي.

Reagent 2× Direct qPCR Mix-Taqman په -20°C، یا په 4°C کې د لنډ مهاله کارونې لپاره ذخیره کیږي که چیرې په مکرر ډول وکارول شي (د 10 ورځو دننه).

د کټ برخې معلومات

Buffer CL: د حجرو lysis تعاملاتو لپاره اړین چاپیریال چمتو کوي.

Buffer ST: په lysate کې فعال ماده ختموي ترڅو په راتلونکی RT باندې د تاثیراتو مخه ونیسي.

DNA پاکونکی: د DNA ریموور، په راتلونکو تجربو کې د جینوم لرې کولو اغیز.

5× مستقیم RT مکس: د لوړ RNA تړاو لري Foregene Reverse Transcriptase، RNase Inhibitor، dNTPs، ثبات کونکي، لوړونکي، اصلاح کونکي، او د غوره سمون لپاره د ریورس ټرانسکرپشن پرائمر (Random Primer، Oligo(dT)₁₈پریمر).

Foregene Protease Plus II: د لیسز بفر په شرایطو کې، حجرې د نیوکلیک اسیدونو خوشې کولو لپاره لیس کیږي.

2× مستقیم qPCR مکس-تقمان: دا ریجنټ ګرم D-Taq DNA پولیمریز، dNTPs، MgCl لري₂د غبرګون بفر، د PCR اصلاح کوونکی، او ثبات ورکوونکی.

د 20 × ROX حواله رنګ: عموما د ABI، Stratagene او نورو شرکتونو په ریښتیني وخت PCR امپلیفیکیشن وسیلو کې کارول کیږي، دا د PCR ټیوبونو او ټیوبونو ترمینځ توپیر تنظیم کولو لپاره کارول کیږي چې د PCR د خوراک کولو غلطیو له امله رامینځته کیږي.د 20 × ROX حوالې رنګ غلظت د مختلف وسیلو لپاره اړین دی ، او کارونکي کولی شي دا د وسیلې وړاندیز شوي غلظت سره سم اضافه کړي.

د RNase وړیا ddH₂O: د دوه مرحلو RT-qPCR عکس العملونو لپاره د RNase څخه پاک تعقیم الټرا خالص اوبه.

وقایې:(ډاډ ترلاسه کړئ چې د کټ کارولو دمخه احتیاطي تدابیر په دقت سره ولولئ)

د تجربې د عملیاتو میتود ته پام وکړئ ترڅو د نمونو ترمینځ د کراس ککړتیا مخه ونیسئ.

د تجربوي چاپیریال او لوښو پاکوالي ته پاملرنه وکړئ ترڅو د RNase ککړتیا او RNA تخریب مخه ونیسئ.

د حجرو تازه یا ښه ساتل شوي نمونې واخلئ او هیڅکله د کنګل شوي حجرو نمونې تکرار مه کاروئ.

5× مستقیم qPCR مکس، 2× مستقیم qPCR مکس-تقمان باید د بار بار کنګل کولو څخه ډډه وکړي، که نه نو دا به د ریورس لیږد او PCR موثریت اغیزه وکړي.

پریپاراشنمخکېعملیات

ډاډ ترلاسه کړئ چې د دې کټ کارولو دمخه لارښوونې په دقت سره ولولئ.د Cell Direct RT-qPCR کټ د چلولو لپاره ساده، اسانه او ګړندی دی، او لارښوونې د ټول کټ په اړه بشپړ معلومات وړاندې کوي او څنګه یې په سمه توګه کارول کیږي.مهرباني وکړئ د کارولو دمخه اړین تجربه توکي او تجهیزات چمتو کړئ.

تجربی مواد او تجهیزات

◆ کلتوري حجرې.

◆ 1.5 ml یا 2 ml، RNase-/DNase-Free centrifuge tube، RNase-/DNase-Free tip، 0.2 ml sterile qPCR ټیوب.

◆ qPCR ماشین، پایپ، د میز ټاپ سنټرفیوج (≥13,400×g) (په تجربوي اړتیاو پورې اړه لري)، او داسې نور.

خوندیتوب

◆ دا محصول یوازې د ساینسي څیړنو موخو لپاره دی، مهرباني وکړئ دا د درملو، کلینیکي، خواړو او کاسمیټیک موخو لپاره مه کاروئ.

◆ کله چې کیمیاوي توکي وکاروئ، مناسب لابراتوار جامې، دستکشې، محافظتي عینکې او داسې نور واغوندئ.

عملیاتلارښود

د سیل لیسیز سیسټمونه، RT سیسټمونه، او د qPCR غبرګون حل ضمیمه کڅوړې په جلا توګه اخیستل کیدی شي، د جزیاتو لپاره په 1 ضمیمه کې (13 پاڼه).

د عملیاتو لارښود

A: نمونه RNA خوشې کول

1. حجرې مخکې له مخکې درملنه شوي: د حجرو کلتور پلیټ په سړه PBS سره وینځئ، بیا حجرې لیز کړئ (10-10⁶)، ۱۰⁶ د حجرو د اندازې په پرتله، د RNA استخراج او پاکولو لپاره د حجرو د RNA جلا کولو کټ (DE-03111) یا د حیواناتو ټول RNA جلا کولو کټ (DE-03011) سپارښتنه کیږي.

۱.۱.تړلي حجرې (24- ښه پلیټ د مثال په توګه)

1.1.1.په هر څاه کې د حجرو شمیر معلوم کړئ، معلومه کړئ چې د حجرو شمیر 1 × 10 دی⁵، او د کلتور له ډش څخه د کلتور مینځنۍ لرې کولو لپاره پایپټ وکاروئ.

1.1.2.هر څاه ته 200 μl مخکې یخ شوی 1 × PBS اضافه کړئ.په مکرر ډول پایپ مه اچوئ او PBS له څاګانو څخه لرې کړئ.پلیټ ټیټ کړئ او د امکان تر حده ډیر PBS لرې کړئ.2 ګام ته لاړ شئ.

1.1.3.د حجرو کلتور مختلف ډش یا د حوالې شمیره جدول 1-1 د سیل کلتور ډش کې د حجرو مینځلو لپاره دمخه 1 × PBS اضافه شوی.

جدول 1-1: د مختلفو حجرو لپاره د PBS دوز

نوټ:د دې لپاره چې د قوي تعقیبي حجرو ډاډ ترلاسه شي,د مینځلو په وخت کې د ډیری حجرو له لاسه ورکولو څخه مخنیوی کیږي.

1.2.د تعلیق حجرې یا د تړلو حجرو په غیر پورس پلیټونو کې کرل شوي

1.2.1.په غیر څو څاه ګانو کې کرل شوي اډرینټ حجرې (د تعلیق حجرې د راتلونکي مرحلې 1.2.2 څخه پیل کیږي)، حجرې د عادي حجرو راټولولو میتود سره سم راټول او جلا کړئ، او په کلتوري پلیټ یا سینټرفیوج ټیوب کې یې ځای په ځای کړئ؛که چیرې ټریپسینیشن کارول کیږي، د حجرو راټولولو او د پاتې پاتې ټریپسین لرې کولو لپاره سینټرفیوګریشن ته اړتیا لري، د حجرو د خپریدو لپاره د PBS بیا ځای پرځای شوي حجرې په انفرادي حجرو کې اضافه شوي.

1.2.2.وروسته له دې چې د حجرو شمیر شمیرل کیږي، 1 × 10 حجرې جلا شوي⁵ د سینټرفیوج ټیوبونو څخه یو، د 10 دقیقو لپاره په 1000 × g کې د سینټرفیوګیشن په واسطه حجرې راټول کړئ.

1.2.3.د سنټرفیوج ټیوب ته 200 μl PBS اضافه کړئ، په مکرر ډول پایپ مه اچوئ، او په مستقیم ډول د PBS جذب کړئ.2 مرحلې ته لاړشئ. (که چیرې د اورښت ستونزمن وي او حجرې بیا ځای په ځای شوي وي، کیدای شي د 1000xg سینټرفیوګ ترسره شي 10 دقیقې وروسته له دې چې سپرناټینټ له مینځه یوسي، د حجرو ګولۍ 2 مرحلې ته ځي)

2. Cell lysis: د Buffer CL لرې کړئ، د خونې د حرارت درجه یې انډول شوی، DNA Eraser او Foregene Protease Plus II، د لاندې جدول 1-2 چمتو شوي لیسیز سیسټم مطابق: (د لیسز محلول د کارولو لپاره چمتو دی).

جدول 1-2: ټوټه کول د سیسټم چمتو کول (یادونه: په یخ چمتو کولو کې)

3. (د مثال په توګه 24 - څاه پلیټ) په هر څاه کې د 200 μl سیل لیسیس ماسټر پیپټ مخلوط کړئ، په مکرر ډول 5-10 ځله ووهئ، د خونې د حرارت درجه (20-25 ℃) کې د 5 دقیقو لپاره سینه کړئ.

نوټ:د بلبلونو د رامینځته کیدو څخه مخنیوي لپاره ، مهرباني وکړئ کله چې د پایپټینګ پایپ پیټ 200μl یا لږ ته تنظیم شوی و.حجرې ممکن د لیسز وروسته ورېځې ښکاري، کوم چې نورمال دی.

4. (د مثال په توګه 24 - څاه پلیټ) په مایع 20 μl بفر ST کې اضافه کیږي (مختلف لیسیز سیسټمونه بفر ST په هغه مقدار کې اضافه شوي چې په جدول 1-3 کې ښودل شوي) ، 5-10 ځله تکرار شوي پایپټینګ ، د خونې په تودوخې کې (20-25 ℃) د 2 دقیقو لپاره انکیوب شوي.

نوټ:د پایپټ نوک د سطحې لاندې تصفیه شوی، ډاډ ترلاسه کوي چې لیسټیټ اضافه شوی,د بلبلونو د رامینځته کیدو مخنیوي لپاره ، مهرباني وکړئ کله چې د پایپټینګ پایپ پیټ 200μl یا لږ ته تنظیم شوی و.

جدول 1-3:بفر ST اضافه کړئ

5. lysate د راتلونکو RT-qPCR تجربو لپاره کارول کیږي.که چیرې وروسته تجربې په وخت ترسره نشي، مهرباني وکړئ دا د 2 ساعتونو څخه زیات په یخ کې وساتئ، او په -20 ℃ یا -80 ℃ (د دریو میاشتو څخه زیات نه) ذخیره کړئ.

ب: د RT سیسټم چمتو کول

1. د 5 × مستقیم RT مخلوط واخلئ او په یخ حمام کې یې واچوئ، پریږدئ چې په طبیعي توګه وخورئ، او په نرمۍ سره یې د وروسته کارولو لپاره مخلوط کړئ؛RNase-Free ddH2O وباسئ او وخورئ او د وروسته کارولو لپاره یې په یخ حمام کې ځای په ځای کړئ.د عکس العمل سیسټم په یخ باندې د لاندې جدول 2-1 مطابق چمتو کړئ.

جدول 2-1: د RT غبرګون سیسټم چمتو کول

2. د سیسټم جوړونې له بشپړیدو وروسته په لاندې جدول کې په نرمۍ سره مخلوط او سینټرفیوژ شوی 2 -2 د عکس العمل حالتونه RT غبرګون.

جدول 2-2: د RT عکس العمل حالت ترتیب

3. د عکس العمل بشپړولو وروسته، د عکس العمل محصول په مستقیم ډول د qPCR لپاره په یخ کې کیښودل شو، مهرباني وکړئ د اوږدې مودې ساتنه -20 ℃ یا -80 ℃ وساتئ.

یادونه: د غیر پاک شوي ټیمپلیټ کارولو له امله، سپینې پریپیټیټس ممکن د برعکس لیږد محصول کې څرګند شي.دا یوه عادي پدیده ده.د راتلونکو تجربو لپاره سمدستي سوپرناټینټ سینټرفیوج کړئ.

د RT عکس العمل په پایله کې د راتلونکي مرحلې اصلي وخت PCR عکس العمل سیسټمونو کې اضافه کیږي ، سپارښتنه کیږي چې د عکس العمل سیسټم له 10-30٪ پورې مقدار اضافه کړئ.

ج: د qPCR غبرګون سیسټم چمتو کول

1. د عکس العمل سیسټم چمتو کولو لپاره د لاندې جدول 3-1 مطابق د CDNA ټیمپلیټ په مرحله کې د B مناسب مقدار چمتو شوی.

یادونه: د cDNA ټیمپلیټ مقدار د qPCR سیسټم 10-30٪ حسابوي.د مثال په توګه، د 20μl qPCR سیسټم کې، 2-6 μl د لیسیز بفر اضافه کړئ، مګر د 6 μl څخه ډیر نه.

2. د qPCR عکس العمل لپاره ښه qPCR شرایط اصلاح کول (د حرارت درجه، او نور).

یادونه: د غوره پایلو ترلاسه کولو لپاره د qPCR عکس العملونو لپاره مطلوب شرایط وکاروئ.

جدول 3-1: د PCR غبرګون سیسټم چمتو کول

1*: د پریمر غلظت د 50-900 nM په حد کې تنظیم کیدی شي کله چې د پریمر عکس العمل فعالیت ضعیف وي.

یادونه: د qPCR سیسټم د تجربوي اړتیاو او فلوروسینس سایکلر ماډل سره سم تنظیم کیدی شي.په 50 کې د qPCR لپارهμl سیسټم، د 20 سره سم د ریجنټ دوز په تناسب تنظیم کړئμl سیسټم.

2*: د فلوروسینس مقداري حرارتي سایکلر سره سم د ROX حوالې رنګ مناسب وروستی غلظت غوره کړئ.د عام فلوروسینس کمیتي سایکلرونو لپاره د ROX حوالې رنګ خورا مناسب غلظت په لاندې جدول کې ښودل شوي:

جدول 3-2: د qPCR عکس العمل شرایط چمتو شوي

یادونه: د غوره qPCR اغیزې ترلاسه کولو لپاره، تدریجي PCR د مختلف ټیمپلیټونو او مختلف پریمرونو لپاره د عکس العمل شرایطو غوره کولو لپاره کارول کیدی شي.د PCR عکس العمل شرایط د فلوروسینس تحلیل کونکي ، ټیمپلیټ ، پریمر او نورو پورې اړه لري توپیر لري. په ځانګړي عملیاتو کې ، د مطلوب عکس العمل شرایط باید د فلوروسینس مقداري حرارتي سایکلر د ځانګړو شرایطو سره سم ډیزاین شي ، د ټیمپلیټ ډول ، د ګټو د برخې اندازه ، د بیس ترتیب ترتیب او د تودوخې محتوا اوږدوالی ، د تودوخې د تودوخې موده او د حرارت درجه او نور.

د ریښتیني وخت PCR پریمر ډیزاین اصول

فارورډ پریمر او ریورس پریمر

د ریښتیني وخت PCR لپاره ، د پریمر ډیزاین خورا مهم دی.پریمرونه د PCR امپلیفیکیشن ځانګړتیا او موثریت پورې اړه لري، او د لاندې اصولو په حواله ډیزاین کیدی شي:

◆ پرائمر اوږدوالی: 18-30bp.

◆ GC منځپانګه: 40-60٪.

◆ د Tm ارزښت: د پریمر ډیزاین سافټویر، لکه پریمر 5، کولی شي د پریمر د Tm ارزښت ورکړي.د پورته او ښکته پرائمرونو Tm ارزښتونه باید د امکان تر حده نږدې وي.د Tm د محاسبې فورمول هم کارول کیدی شي: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).کله چې د PCR ترسره کول، د پریمر Tm ارزښت 5 °C څخه ښکته تودوخه عموما د انیل کولو تودوخې په توګه غوره کیږي (د انیل کولو تودوخې ورته زیاتوالی کولی شي د PCR عکس العمل ځانګړتیا زیاته کړي).

◆ پرائمر او PCR محصولات:

◆ ډیزاین پریمر PCR امپلیفیکیشن محصول اوږدوالی په غوره توګه 100-150bp دی.

◆ د نمونې په ثانوي ساختماني ساحه کې ډیزاین پریمر باید د امکان تر حده مخنیوی وشي.

◆ د پورته او ښکته پرائمرونو د 3′ پایونو تر مینځ د 2 یا ډیرو تکمیلي اډو د جوړولو څخه مخنیوی وکړئ.

◆ پرائمر 3′ ترمینل بیس د 3 اضافي پرله پسې G یا C سره شتون نلري.

◆ پرائمرونه پخپله بشپړونکي جوړښتونه نه لري، که نه نو د ویښتو پین جوړښت به رامینځته شي چې د PCR امپلیفیکیشن اغیزه کوي.

◆ ATCG باید د پریمر په ترتیب کې د امکان تر حده په مساوي توګه وویشل شي، او د 3′ ترمینل بیس باید د T په څیر مخنیوی وشي.

ضمیمه1:Cell مستقیمRT-qPCR د کټ برخهد ضمیمه کڅوړه

1.Cell Lysis حل