د پاکولو کالم تړل شوی دی

په دې کټ کې، د جینومیک DNA استخراج په عملیاتو کې، د پاکولو کالم په مستقیم ډول د نمونې انزیماتیک لیسیز مخلوط کې پرته له سینټرفیوګریشن مرحلې څخه جذب کیږي، او د پاکولو کالم ممکن د نمونې د انزایمیزیشن او لوړ ویسکوسیت له امله بند شي.

لاندې احتمالي لاملونه په لاندې ډول دي:

1. د نسجونو د نمونو نیمګړی انزیماتیک هضم.

سپارښتنه: د Foregene Protease د نمونې پروسس وخت په مناسبه توګه وغځول شي یا سوپرناټینټ د 12,000 rpm (~ 13,400 × g) کې د 5 دقیقو لپاره د سینټرفیوګریشن وروسته واخیستل شي.

2. د نسجونو نمونو یا لوی نسجونو ډیر کارول.

سپارښتنه: دا غوره ده چې په نمونه کې د 1 بکال سویب څخه ډیر نه وي؛که نمونه ډیره لویه وي، د Buffer ST1، Foregene Protease، buffer ST2 مطابق دوز زیات کړئ.

3. د نمونې viscosity ډیر لوړ دی.

سپارښتنه: نمونې د جینومیک DNA استخراج دمخه د 10 mM Tris-HCl سره په مناسبه توګه حل کیدی شي.

4. د وینې کارت ټوټې ټوټې شوې.

سپارښتنه: د وینې د ځای (FTA کارت) جینومیک استخراج د 6 مرحلې انتقالي سنټرفیوګریشن وخت په مناسب ډول وغځول شي.

ټیټ حاصل یا هیڅ DNA

ډیری وختونه ډیری فاکتورونه شتون لري چې د جینومیک DNA حاصل اغیزه کوي، پشمول د نمونې اصل، د نمونې ذخیره کولو شرایط، د نمونې چمتو کول، لاسوهنه، او نور.

جینومیک DNA د استخراج پرمهال نشي ترلاسه کیدی

احتمالي لاملونه په لاندې ډول دي:

1. د نمونو ناسم ساتل یا د ډیر وخت لپاره ذخیره کول د جینومیک DNA تخریب لامل کیږي.

سپارښتنه: د خولې سویبونه باید په غوره توګه تازه نمونه شي، او دا مشوره نه کیږي چې د جینومیک DNA استخراج عملیاتو لپاره ساتل شوي سویبونه وکاروئ؛د وینې ځای نمونې باید ډاډ ترلاسه کړي چې کیفیت وړ دی او د ذخیره کولو وخت باید ډیر اوږد نه وي.

2. د نسج ډیر لږ کارول ممکن د اړونده جینومیک DNA د استخراج لامل نشي.

سپارښتنه: د عملیاتو لارښود کې د بکسل سویب نمونې ورکولو لارښوونې تعقیب کړئ، او څومره چې ممکنه وي مسح کړئ ترڅو د جینومیک DNA استخراج لپاره کافي حجرې د شفاهي سویب سره وصل شي؛د وینې د ځای نمونې استخراج لپاره، د وینې د ځای قطع کولو ساحه په مناسبه توګه لوړه کیدی شي.

3. Foregene Protease په ناسمه توګه ساتل کیږي، چې په پایله کې یې فعالیت کمیږي یا غیر فعال کیږي.

سپارښتنه: د Foregene Protease د ذخیره کولو شرایط تایید کړئ یا د انزایمیک عکس العمل لپاره د نوي Foregene پروټیز سره بدل کړئ.

4. د کټ ناسم ساتنه یا د ذخیره کولو وخت ډیر اوږد دی، چې په پایله کې د کټ ځینې برخې ناکامیږي.

سپارښتنه: د اړونده پروسیجرونو لپاره د بکسل سویب DNA جلا کولو کټ واخلئ.

5. بفر WB مطلق ایتانول نه اضافه کوي.

سپارښتنه: تایید کړئ چې بفر WB د مطلق ایتانول صحیح حجم اضافه کوي.

6. په سیلیکون فلم کې ایلوینټ په سمه توګه نه دی اضافه شوی.

سپارښتنه: د سیلیکون جھلی په مینځ کې د 65 ° C دمخه ګرم شوي ایلیونټ څاڅکي اضافه کړئ او د کوټې په حرارت کې د 5 دقیقو لپاره پریږدئ ترڅو د elution موثریت ډیر شي.

د ټیټ حاصل جینومیک DNA جلا شوی

لاندې احتمالي لاملونه په لاندې ډول دي:

1. د نمونو ناسم ساتل یا د ډیر وخت لپاره ذخیره کول د جینومیک DNA تخریب لامل کیږي.

سپارښتنه: د اورل سویبونه په غوره توګه تازه نمونه شوي، او ساتل شوي سویبونه باید د جینومیک DNA استخراج لپاره ونه کارول شي.

2. که چیرې د نسج نمونې اندازه ډیره لږه وي، استخراج شوي جینومیک DNA مواد به لږ وي.

سپارښتنه: په عملیاتي لارښود کې د شفاهي سویب نمونې لارښوونې تعقیب کړئ، څومره چې امکان ولري مسح کړئ ترڅو کافي حجرې د جینومیک DNA استخراج لپاره د شفاهي سویب سره وصل شي.

3. Foregene Protease په ناسمه توګه ساتل کیږي، چې په پایله کې یې فعالیت کمیږي یا غیر فعال کیږي.

سپارښتنه: د Foregene Protease د ذخیره کولو شرایط تایید کړئ یا د انزایمیک عکس العمل لپاره د نوي Foregene پروټیز سره بدل کړئ.

4. د الکولو ستونزې.

سپارښتنه: د elution لپاره Buffer EB وکاروئ؛که چیرې ddH کاروئ₂O یا نور eluents، تایید کړئ چې د eluate pH د 7.0-8.5 ترمنځ دی.

5. eluate په سمه توګه د dropwise نه اضافه کیږي.

سپارښتنه: د سیلیکون جھلی په مینځ کې د ایلیونټ څاڅکي اضافه کړئ او د خونې په حرارت کې د 5 دقیقو لپاره پریږدئ ترڅو د elution موثریت زیات شي.

6. د elution مایع ډیر لږ جمع کیږي.

سپارښتنه: د جینومیک DNA elution لپاره eluent وکاروئ لکه څنګه چې په لارښوونو کې اړین وي، لږترلږه له 15 μl څخه کم نه وي.

د جینومیک DNA ټیټ پاکوالی جلا شوی

د جینومیک DNA ټیټ پاکوالی کولی شي د لاندې جریان تجربو ناکامي یا نا رضایتي پایلې رامینځته کړي ، لکه: انزایمونه نشي خلاصیدلی ، PCR نشي کولی د ګټو جین ټوټه ترلاسه کړي ، او داسې نور.

احتمالي لاملونه په لاندې ډول دي:

1. د هیټروپروټین ککړتیا، د RNA ککړتیا.

تحلیل: د پاکولو کالم د بفر PW په کارولو سره نه مینځل شوی؛د بفر PW واش پاکولو کالم د سم سنټرفیوګل سرعت په کارولو سره نه و مینځل شوی.

سپارښتنه: ډاډ ترلاسه کړئ چې د ایتانول اضافه کولو دمخه په سپرناټینټ کې باران شتون نلري؛ډاډ ترلاسه کړئ چې د لارښوونو سره سم د پاکولو کالم ومینځئ، او دا مرحله نشي پریښودل کیدی.

2. د ناپاکۍ آیون ککړتیا.

تحلیل: د بفر WB د مینځلو پاکولو کالم یوازې یو ځل پریښودل شوی یا مینځل شوی ، په پایله کې د پاتې ionic ککړتیا لامل کیږي.

سپارښتنه: ډاډه اوسئ چې د بفر WB 2 ځله ومینځئ لکه څنګه چې د امکان تر حده د پاتې ایونونو لرې کولو لپاره لارښود شوی.

3. د RNA انزایم ککړتیا.

تحلیل: بهرني RNases بفر ته اضافه شوي؛د بفر PW واش عملیات غلط وو، د RNase پاتې شونو په پایله کې، د لاندې جریان RNA تجربوي عملیات، لکه د ویټرو لیږد په اړه اغیزه کوي.

سپارښتنه: د Foregene لړۍ د نیوکلیک اسید جلا کولو کټونه کولی شي د RNase اضافي اضافه کولو پرته RNA لرې کړي، په دې توګه buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit RNase اضافه کولو ته اړتیا نلري؛ډاډ ترلاسه کړئ چې د بفر PW مینځلو پاکولو کالم لپاره لارښوونې تعقیب کړئ، او دا مرحله نشي پریښودل کیدی.

4. د ایتانول پاتې شوني.

تحلیل: بفر WB د پاکولو کالم مینځلو وروسته خالي ټیوب سینټرفیوګریشن نه دی ترسره کړی.

سپارښتنه: د لارښوونو سره سم د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن عملیات ترسره کړئ.

5. نورې ناپاکۍ ککړتیا.

تحلیل: خوندي شوي نمونې یا ځانګړي نمونې مخکې له مخکې درملنه نه کیږي.

سپارښتنه: د لارښوونې سره سم نمونه په بشپړه توګه پریټریټ کړئ.