Escherichia coli O157: H7 د نیوکلیک اسید کشف کټ (PCR فلوروسینټ تحقیقات میتود)
د کټ تفصیل:
بلی نهFP102
دا د E. coli O157:H7 د ګړندي کشف او سکرینینګ لپاره په خواړو ، تغذیه ، اوبو نمونو او چاپیریال نمونو کې کارول کیږي.
توضیحات
دا د E. coli O157:H7 د ګړندي کشف او سکرینینګ لپاره په خواړو ، تغذیه ، اوبو نمونو او چاپیریال نمونو کې کارول کیږي.
[د ازموینې اصول]د فلوروسینټ PCR ټیکنالوژۍ د اصولو له مخې، ځانګړي پرائمرونه او د تکمان تحقیقات د Escherichia coli O157 ځانګړي جین لپاره ډیزاین شوي: H7، او د فلوروسینټ PCR وسیلې لخوا کشف شوي، ترڅو د Escherichia coli O157: H7 د DNA کیفیت کشف احساس کړي.
د کټ منځپانګې
یادونه: د ROX چینل تحقیقات شامل ندي.
| Cاجزا | مشخصات | Qیووالی |
| بفر اې | ټیوب | 1 |
| بفر ب | ټیوب | 1 |
| مثبت کنټرول | ټیوب | 1 |
| منفي کنټرول | ټیوب | 1 |
په تمه کارول
لپاره کارول کیږي د E. coli O157: H7 چټک کشف او معاینه کول په خوړو، تغذیه، د اوبو نمونو او چاپیریال نمونو کې.
د ذخیره کولو شرایط او د ختمیدو نیټه
په تیاره کې په -20 ℃ کې ذخیره کړئ او د بار بار یخولو او غوړیدو څخه مخنیوی وکړئ.
د اعتبار موده 12 دهمیاشتې، او د تولید نیټه په بهرنی بسته بندۍ کې ښودل شوې.
وسایل او د مصرف وړ توکي
د فلوروسینټ کمیتي PCR وسیله، پایپټ ټوپک او د میچ کولو لارښوونې، ورټیکس شیکر، مینی سنټرفیوج.
کارول
1. د نمونې پروسس کول
1.1 د نمونې ډول: دا کټ د خواړو، خواړو، اوبو نمونو او نورو نمونو لپاره مناسب دی چې شک کیږي د Escherichia coli O157:H7 لخوا ککړ شوي.د ژور پروسس شوي غوښې محصولاتو ، مشروباتو او نورو موادو لپاره چې رنګونه لري ، دوی باید مینځل شي ترڅو د فلوروسینس سیګنال راټولولو باندې اغیزه ونلري.
1.2 د نمونې پروسس کول: د Escherichia coli O157 د نمونې چمتو کولو، بډایه کولو کلتور او جلا کولو لپاره "GB 4789.10-2016 د خوړو خوندیتوب ملي معیاري خوراکي مایکروبیولوژیکي ازموینه د Escherichia coli O157: H7 ازموینه" وګورئ.
- Nد یوکلیک اسید استخراج
په 1.5 ملی لیتر سینټرفیوج ټیوب کې 20 ملی لیتر د بډای کولو محلول واخلئ، 200 μL مایکروبیل لیسیټ اضافه کړئ (اضافي کټ ته اړتیا ده)، د 30 ثانیو لپاره وورتیکس، په لنډه توګه سینټریفیوج کړئ، او یو طرف یې واچوئ.
تبصرې: له لیسټیټ څخه د نیوکلیک اسید استخراج باید په 10 دقیقو کې بشپړ شي ، او د اوږدې مودې لپاره زیرمه نشي.
3. د نیوکلیک اسید پراخوالی
3.1 د فلوروسینټ کمیتي PCR وسیله د کارولو لپاره چالان کړئ.
Buffer A او Buffer B د کټ څخه، دوی په ښه توګه وخورئ، او په لنډه توګه سینټریفیوج کړئ.18 μL بفر A او 2 μL بفر B د PCR عکس العمل ټیوب ته اضافه کړئ.بیا 5 ملی لیتر هر یو منفي کنټرول، استخراج شوي نیوکلیک اسید، او مثبت کنټرول د PCR غبرګون ټیوبونو کې اضافه کړئ، ټیوبونه کیپ کړئ، او په لنډه توګه سینټرفیوج.
3.3 د PCR عکس العمل ټیوب د فلوروسینټ PCR ماشین ته انتقال کړئ، او د امپلیفیکیشن تجربو ترسره کولو لپاره لاندې پروسیجرونه وکاروئ: د عکس العمل سیسټم لپاره 25 ملی لیتر غوره کړئ، د هر دورې لپاره په 60 ° C کې د فلوروسینس سیګنالونه راټول کړئ، او د کشف چینل لپاره FAM غوره کړئ.
| ګام | پروګرام | د سایکلونو شمیر |
| 1 | 37℃ 5min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (د فلوروسینس راټولول) |
د ستونزو تحلیل لپاره لارښوونې
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
هیڅ RNA نشي ایستل کیدی یا د نیوکلیک اسید حاصل کم وي
معمولا ډیری فکتورونه شتون لري چې د بیا رغونې موثریت اغیزه کوي، لکه: د نمونې RNA منځپانګې، د عملیاتو طریقه، د اخراج حجم، او نور.
د عامو لاملونو تحلیل:
1. د یخ حمام یا د ټيټ تودوخې (4 ° C) د عملیاتو پرمهال سینټرفیوګیشن.
وړاندیز: د کوټې د حرارت درجه (15-25 ° C) عملیات، هیڅکله د یخ حمام او د ټیټ تودوخې سنټرفیوج.
2. د نمونې ناسم ذخیره کول یا د نمونې ذخیره د ډیر وخت لپاره.
وړاندیز: نمونې په -80 ° C کې ذخیره کړئ یا په مایع نایتروجن کې کنګل کړئ، او د بار بار کنګل کولو څخه ډډه وکړئ؛هڅه وکړئ د RNA استخراج لپاره تازه راټول شوي نمونې وکاروئ.
3. ناکافي نمونه lysis
سپارښتنه: مهرباني وکړئ ډاډ ترلاسه کړئ چې نمونه او کاري محلول (لینیر اکریلامایډ) په ښه توګه مخلوط شوي او د 10 دقیقو لپاره د خونې په حرارت درجه کې (15-25 ° C)
4. په غلطه توګه الیونټ اضافه شوی
سپارښتنه: ډاډ ترلاسه کړئ چې RNase-Free ddH2O د پاکولو کالم د غشا په مینځ کې اضافه شوي
5. په بفر viRW2 کې د انهایډروس ایتانول ناسم حجم
وړاندیز: مهرباني وکړئ لارښوونې تعقیب کړئ، د بفر viRW2 کې د انهایډروس ایتانول صحیح حجم اضافه کړئ او د کټ کارولو دمخه یې ښه مخلوط کړئ.
6. د نمونې ناسم کارول.
وړاندیز: په هر 500μl بفر viRL کې 200µl نمونه.د نمونې ډیر مقدار به د RNA استخراج د کمیدو لامل شي.
7. نامناسب اخراج حجم یا نیمګړتیا.
وړاندیز: د پاکولو کالم الیونټ حجم 30-50μl دی؛که د elution اغیز د قناعت وړ نه وي، نو سپارښتنه کیږي چې مخکې ګرم RNase-Free ddH اضافه کړئ.2O او د خونې په حرارت کې د ځای کولو وخت وغځوئ، لکه 5-10min
8. د پاکولو کالم په بفر viRW2 کې له مینځلو وروسته د ایتانول پاتې شوني لري.
وړاندیز: که چیرې ایتانول په بفر viRW2 کې له مینځلو وروسته او د 2 دقیقو لپاره خالي ټیوب سینټرفیوګریشن کې پاتې شي ، د پاکولو کالم د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن وروسته د 5 دقیقو لپاره د خونې په حرارت کې پریښودل کیدی شي ترڅو پاتې ایتانول په بشپړ ډول لرې کړي.
د پاکو RNA مالیکولونو تخریب
د پاک شوي RNA کیفیت په فکتورونو پورې اړه لري لکه د نمونې ذخیره کول، د RNase ککړتیا، او عملیات.
د عامو لاملونو تحلیل:
1. راټول شوي نمونې په وخت کې خوندي شوي ندي.
وړاندیز: که نمونه د راټولولو وروسته په وخت کې ونه کارول شي، مهرباني وکړئ دا په -80 ℃ یا مایع نایټروجن کې په سمدستي توګه ذخیره کړئ.د RNA مالیکولونو استخراج لپاره، هڅه وکړئ هرکله چې امکان ولري تازه راټول شوي نمونې وکاروئ.
2. راټول شوي نمونې یخ شوي او په مکرر ډول پړسیدلي.
وړاندیز: د نمونې راټولولو او ذخیره کولو په جریان کې د بار بار یخولو او پړسیدو څخه ډډه وکړئ (له یو ځل څخه زیات نه)، که نه نو د نیوکلیک اسید حاصل به کم شي.
3.RNase په عملیاتي خونه کې معرفي شوی و یا د ضایع کیدو وړ دستکشې، ماسک او نور نه و اغوستل شوي.
وړاندیز: د RNA مالیکول استخراج تجربه په یو جلا RNA عملیات خونه کې غوره ترسره کیږي، او د تجربې میز د تجربې څخه مخکې پاک شوی.د تجربې په جریان کې د ضایع کیدو وړ دستکشې او ماسکونه واغوندئ ترڅو د RNase معرفي کیدو له امله د RNA تخریب مخه ونیسي.
4. ریجنټ د کارولو پرمهال د RNase لخوا ککړ شوی.
وړاندیز: د اړوندو تجربو لپاره د نوي ویروس RNA جلا کولو کټ سره بدل کړئ.
5. د سینټرفیوج ټیوبونو د RNase ککړتیا، د پایپټ لارښوونې، او داسې نور. وړاندیز: ډاډ ترلاسه کړئ چې د سینټریفیوج ټیوبونه، پایپټ ټیوبونه، او پایپټ ټول د RNase څخه پاک دي.
پاک شوي RNA مالیکولونه د لاندې جریان تجربې اغیزمنې کړې
د RNA مالیکولونه چې د پاکولو کالم لخوا پاک شوي د لاندې تجربو اغیزه کوي که چیرې د مالګې ایونونه یا پروټینونه ډیر وي، لکه: ریورس لیږد، شمالي بلاټ، او نور.
1. په تخریب شوي RNA مالیکولونو کې پاتې مالګې ایونونه شتون لري.
سپارښتنه: ډاډ ترلاسه کړئ چې د انهایډروس ایتانول صحیح حجم بفر viRW2 کې اضافه شوی ، او د عملیاتي لارښوونو له مخې د درست سینټرفیوګریشن سرعت سره سم د پاکولو کالم دوه ځله ومینځئ؛ که چیرې لاهم مالګې آیونونه پاتې وي ، تاسو کولی شئ د بفر viRW2 د پاکولو کالم ته اضافه کړئ او د کوټې د حرارت درجه 5 دقیقو لپاره پریږدئ.بیا سینټرفیوګریشن ترسره کړئ ترڅو د مالګې آئن ککړتیا تر لوی حده لرې کړي
2. په خارج شوي RNA مالیکولونو کې پاتې ایتانول شتون لري
وړاندیز: یوځل چې تایید شي چې د پاکولو کالمونه د بفر viRW2 لخوا مینځل شوي ، په عملیاتي لارښوونو کې د سینټرفیوګل سرعت سره سم د خالي ټیوب سینټرفیوګریشن ترسره کړئ.که چیرې لاهم ایتانول پاتې وي ، نو دا د خالي ټیوب سینټرفیوګیشن وروسته د خونې په حرارت کې د 5 دقیقو لپاره پریښودل کیدی شي ترڅو پاتې ایتانول تر لوی حد پورې لرې کړي.
لارښود لارښود:
د ویروس RNA جلا کولو کټ لارښوونې لارښود
