Foreasy HS Taq DNA پولیمریز
د کټ تفصیل:
◮لوړ ځانګړتیا: د لوړ ګرم پیل فعالیت سره انزایم.
◮ګړندی پراخوالی: 10 ثانیې / kb.
◮د لوړې نمونې تطابق: د لوړې کچې لوړولو لپاره کارول کیدی شيGCارزښتاود DNA ټیمپلیټ مختلف مشکل ته وده ورکوي.
◮قوي وفاداري: وفاداري شپږ ځله دهof عادي Taq انزايم.
تفصیل
Foreasy HS Taq DNA Polymerase یو نوی Taq انزایم دی چې د جین د بیا یوځای کولو ټیکنالوژۍ په واسطه د Escherichia coli انجینرۍ باکتریا کې څرګند شوی.وروسته له دې چې انزایم د ځانګړي پروسې سره درملنه کیږي'د s فعالیت د تودوخې فعالولو دمخه مخنیوی کیږي، په دې توګه د ټیټ حرارت شرایطو لاندې د پریمرونو یا پریمر ډیمرونو غیر مشخص انیل کولو له امله د غیر مشخص پراخوالي مخه نیسي.دا محصول د خورا ځانګړي PCR عکس العمل لپاره مناسب دیion, M ultiple x PCR , لوړ GC منځپانګه (> 60٪) ,سرهثانوي جوړښتیا بلقوي پس منظر جینومicsپراخوالی او په لویه پیمانه جینومicsamplification کشف.انزایم د 5' → 3' DNA پولیمریز فعالیت او 5' → 3' exonuclease فعالیت لري، مګر د 3' → 5' exonuclease فعالیت نلري.
د کټ اجزا
| اجزا | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA پولیمریز (5 U/μL) | 5000 U (1 ملی لیتر) | 50 KU (10 ملی لیتر) | 500 KU (100 ml) |
| 2× Taq عکس العمل بفر | 25 ملی لیتر × 5 | 250 ملی لیتر × 5 | 500 ملی لیتر × 25 |
ځانګړتیاوې او ګټې
- لوړ ځانګړتیا: هغه انزایم چې د لوړ ګرم پیل فعالیت سره.
- ګړندی پراخوالی: 10 ثانیې / kb.
- د لوړې نمونې تطابق: د لوړې کچې لوړولو لپاره کارول کیدی شيGCارزښتاود DNA ټیمپلیټ مختلف مشکل ته وده ورکوي.
- قوي وفاداري: وفاداري شپږ ځله دهof عادي Taq انزايم.
د کټ غوښتنلیک
- مختلف PCR/qPCR سیسټم او مستقیم PCR سیسټم
- د PCR پراخ شوی DNA ټوټه
- د DNA نښه
- د DNA ترتیب کول
- PCR پلس A دم
د فعالیت تعریف
1U: د انزایم مقدار چې د 10 nmol د شاملولو لپاره اړین دیDNAپه تیزاب کې نه حل کیدونکي ماده کې د فعال سالمون سپرم DNA د ټیمپلیټ / پریمر په توګه کارول کیږي، 74 ° C، 30 دقیقې.
د عکس العمل حالت
| د حرارت درجه | د غبرګون وخت | د سایکل وخت |
| ۳۷ درجې سانتي ګراد | 5 دقیقې | 1 |
| 94 درجې سانتي ګراد | 5 دقیقې | 1 |
| 94 درجې سانتي ګراد | 10 ثانیې | 40 |
| 60 درجې سانتي ګراد | 10 ثانیې |
یادونه:د 10 µL او 20 µL سیسټمونو لپاره، د معدني تیلو مساوي مقدار اضافه کړئ که چیرې تودوخې سایکلر د تودوخې پوښ نلري.
د PCR عکس العمل شرایط د ټیمپلیټونو ، پریمرونو او ورته نورو جوړښتي شرایطو پورې اړه لري.په ځانګړي عملیاتو کې ، دا اړینه ده چې د غوره عکس العمل شرایط ډیزاین کړئ ، پشمول د انیل کولو تودوخې ، تمدید وخت ، او داسې نور ، د ځانګړو شرایطو سره سم لکه د ټیمپلیټ ډول ، د هدف ټوټې اندازه ، د پراخه شوي ټوټې اساس ترتیب ، او د GC مینځپانګه او د پریمر اوږدوالی.
ذخیره کول
-20 ± 5 °C د 2 کلونو لپاره یا په -80 °C د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره.
د پراخیدو نښې نشته
1. په کټ کې د Taq DNA پولیمریز خپل فعالیت د ناسم ذخیره کولو یا د کټ د ختمیدو له امله له لاسه ورکوي.
سپارښتنه: د کټ ذخیره کولو شرایط تایید کړئ؛د PCR سیسټم ته د Taq DNA پولیمیریز مناسب مقدار بیا اضافه کړئ یا د اړوندو تجربو لپاره د ریښتیني وخت PCR کټ واخلئ.
2. په DNA کې د Taq DNA Polymerase ډیری مخنیوی کونکي شتون لري.
وړاندیز: ټیمپلیټ بیا پاک کړئ یا د کارول شوي ټیمپلیټ مقدار کم کړئ.
3. د Mg2+ غلظت مناسب ندی.
سپارښتنه: د 2× اصلي PCR مکس د Mg2+ غلظت چې موږ یې چمتو کوو 3.5mM دی.په هرصورت، د ځینو ځانګړو پریمرونو او ټیمپلیټونو لپاره، د Mg2+ غلظت ممکن لوړ وي.نو تاسو کولی شئ مستقیم MgCl2 اضافه کړئ ترڅو د Mg2+ غلظت اصلاح کړئ.دا سپارښتنه کیږي چې د اصلاح کولو لپاره هر ځل Mg2+ 0.5mM زیات کړئ.
4. د PCR امپلیفیکیشن شرایط مناسب ندي، او د پریمر ترتیب یا غلظت ناسم دی.
وړاندیز: د پریمر ترتیب درستیت تایید کړئ او پریمر خراب شوی نه وي؛که د امپلیفیکیشن سیګنال ښه نه وي، هڅه وکړئ د انیل کولو تودوخې ټیټ کړئ او د پریمر غلظت په مناسب ډول تنظیم کړئ.
5. د ټیمپلیټ مقدار ډیر لږ یا ډیر دی.
سپارښتنه: د ټیمپلیټ لینریزیشن ګریډینټ ډیلیشن ترسره کړئ، او د ریښتیني وخت PCR تجربې لپاره د غوره PCR اغیزې سره د ټیمپلیټ غلظت غوره کړئ.
NTC ډیر لوړ فلوروسینس ارزښت لري
1. Reagent ککړتیا د عملیاتو په جریان کې رامینځته کیږي.
سپارښتنه: د ریښتیني وخت PCR تجربو لپاره د نوي ریجنټونو سره بدل کړئ.
2. ککړتیا د PCR عکس العمل سیسټم چمتو کولو په جریان کې پیښیږي.
سپارښتنه: د عملیاتو په جریان کې اړین محافظتي تدابیر ونیسئ، لکه: د لیټیکس دستکشې اغوستل، د فلټر سره د پایپټ ټیپ کارول، او داسې نور.
3. د پرائمر تخریب کیږي، او د پریمرونو تخریب به د غیر مشخص پراخوالي لامل شي.
وړاندیز: د SDS-PAGE الیکٹروفورسس څخه کار واخلئ ترڅو معلومه کړي چې آیا پرائمرونه خراب شوي، او د ریښتیني وخت PCR تجربو لپاره نوي پریمرونو سره بدل کړئ.
پریمر ډیمر یا غیر مشخص امپلیفیکشن
1. د Mg2+ غلظت مناسب نه دی.
وړاندیز: د Mg2+ غلظت د 2× اصلی PCR ایزی TM مکس چې موږ یې چمتو کوو 3.5 mM دی.په هرصورت، د ځینو ځانګړو پریمرونو او ټیمپلیټونو لپاره، د Mg2+ غلظت ممکن لوړ وي.نو تاسو کولی شئ مستقیم MgCl2 اضافه کړئ ترڅو د Mg2+ غلظت اصلاح کړئ.دا سپارښتنه کیږي چې د اصلاح کولو لپاره هر ځل Mg2+ 0.5mM زیات کړئ.
2. د PCR annealing تودوخه خورا ټیټه ده.
وړاندیز: د PCR انیل کولو تودوخه هر ځل د 1 ℃ یا 2 ℃ لخوا لوړه کړئ.
3. د PCR محصول ډیر اوږد دی.
سپارښتنه: د ریښتیني وخت PCR محصول اوږدوالی باید د 100-150bp تر منځ وي ، له 500bp څخه ډیر نه وي.
4. د پرائمر تخریب کیږي، او د پریمرونو تخریب به د ځانګړي پراخوالي څرګندیدو لامل شي.
وړاندیز: د SDS-PAGE الیکٹروفورسس څخه کار واخلئ ترڅو معلومه کړي چې آیا پرائمرونه خراب شوي، او د ریښتیني وخت PCR تجربو لپاره نوي پریمرونو سره بدل کړئ.
5. د PCR سیسټم ناسم دی، یا سیسټم خورا کوچنی دی.
وړاندیز: د PCR عکس العمل سیسټم خورا کوچنی دی د کشف دقت د کمیدو لامل کیږي.دا غوره ده چې د ریښتیني وخت PCR تجربې بیا پیلولو لپاره د کمیتي PCR وسیلې لخوا وړاندیز شوي عکس العمل سیسټم وکاروئ.
د کمیتي ارزښتونو ضعیف تکرار وړتیا
1. وسیله خرابه ده.
وړاندیز: ممکن د وسیلې د هر PCR سوري تر مینځ غلطۍ شتون ولري ، چې د تودوخې مدیریت یا کشف کولو پرمهال د ضعیف تولید وړتیا لامل کیږي.مهرباني وکړئ د اړونده وسیلو لارښوونو سره سم وګورئ.
2. د نمونې پاکوالی ښه نه دی.
سپارښتنه: ناپاک نمونې به د تجربې ضعیف تولیدي وړتیا رامینځته کړي ، پدې کې د ټیمپلیټ او پریمر پاکوالی شامل دي.دا غوره ده چې ټیمپلیټ بیا پاک کړئ، او پرائمرونه د SDS-PAGE لخوا غوره شوي دي.
3. د PCR سیسټم چمتو کولو او ذخیره کولو وخت ډیر اوږد دی.
وړاندیز: د چمتووالي سمدستي وروسته د PCR تجربې لپاره د ریښتیني وخت PCR سیسټم وکاروئ ، او د ډیر وخت لپاره یې مه پریږدئ.
4. د PCR امپلیفیکیشن شرایط مناسب ندي، او د پریمر ترتیب یا غلظت ناسم دی.
وړاندیز: د پریمر ترتیب درستیت تایید کړئ او پریمر خراب شوی نه وي؛که د امپلیفیکیشن سیګنال ښه نه وي، هڅه وکړئ د انیل کولو تودوخې ټیټ کړئ او د پریمر غلظت په مناسب ډول تنظیم کړئ.
5. د PCR سیسټم ناسم دی، یا سیسټم خورا کوچنی دی.
وړاندیز: د PCR عکس العمل سیسټم خورا کوچنی دی د کشف دقت د کمیدو لامل کیږي.دا غوره ده چې د ریښتیني وخت PCR تجربې بیا پیلولو لپاره د کمیتي PCR وسیلې لخوا وړاندیز شوي عکس العمل سیسټم وکاروئ.
