Foreasy Taq DNA پولیمریز
د کټ تفصیل:
◮لوړ ځانګړتیا: انزایم یو ځانګړی ګرم پیل فعالیت لري.
◮ګړندی پراخوالی: 10 ثانیې / kb.
◮په لوړه کچه د تطابق وړ ټیمپلیټ: د GC لوړ ارزښت په مؤثره توګه لوړولو لپاره کارول کیدی شي ، د DNA ټیمپلیټ مختلف مشکل ته وده ورکول.
◮قوي وفاداري: عادي تاق انزایم 6 ځله.
◮قوي حرارتي ثبات: دا د یوې اونۍ لپاره په 37 ° C کې کیښودل کیدی شي او له 90٪ څخه ډیر فعالیت ساتي.
تفصیل
Foreasy Taq DNA Polymerase یو نوی Taq انزایم دی چې په Escherichia coli انجینرۍ باکتریا کې د جین بیا ترکیب ټیکنالوژۍ لخوا څرګند شوی.انزایم پخپله یو ځانګړی ګرم پیل فعالیت لري او د دودیز PCR او qPCR لپاره کارول کیدی شي؛دا د 5'→ 3' DNA پولیمریز فعالیت او 5'→ 3' exonuclease فعالیت لري، مګر د 3'→ 5' exonuclease فعالیت نلري.
د کټ اجزا
| اجزا | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA پولیمریز(5 U/μL) | 5000 U (1 ملی لیتر) | 50 KU (10 ملی لیتر) | 500 KU (100 ml) |
| 2× Taq عکس العمل بفر | 25 ملی لیتر × 5 | 250 ملی لیتر × 5 | 500 ملی لیتر × 25 |
ځانګړتیاوې او ګټې
- لوړ ځانګړتیا: انزایم یو ځانګړی ګرم پیل فعالیت لري.
- ګړندی پراخوالی: 10 ثانیې / kb.
- په لوړه کچه د تطابق وړ ټیمپلیټ: د GC لوړ ارزښت په مؤثره توګه لوړولو لپاره کارول کیدی شي ، د DNA ټیمپلیټ مختلف مشکل ته وده ورکول.
- قوي وفاداري: عادي تاق انزایم 6 ځله.
- قوي حرارتي ثبات: دا د یوې اونۍ لپاره په 37 ° C کې کیښودل کیدی شي او له 90٪ څخه ډیر فعالیت ساتي
د کټ غوښتنلیک
مختلف PCR/qPCR سیسټمونه او مستقیم PCR سیسټمونه
د DNA ټوټې PCR پراخول
د DNA لیبل کول
د DNA ترتیب کول
PCR A-tailed
U تعریف
1U: د انزایم مقدار چې د 10 nmol deoxynucleotides د اسید نه حل کېدونکي مادې کې شاملولو لپاره اړین دي د فعال سالمون سپرم DNA د ټیمپلیټ/پرائمر په توګه د 30 دقیقو لپاره په 74 درجې سانتي ګراد کې.
د عکس العمل حالت
| د حرارت درجه | وخت | سایکل |
| ۳۷ درجې سانتي ګراد | ۵ دقیقې | 1 |
| 94 درجې سانتي ګراد | ۵ دقیقې | 1 |
| 94 درجې سانتي ګراد | 10 ثانیې | 35 |
| 60 درجې سانتي ګراد | 10 ثانیې | |
| ۷۲ سانتي ګراد | 20 ثانیې/کیلوبایټ | |
| ۷۲ سانتي ګراد | 2 دقیقې | 1 |
ذخیره کول
-20 ± 5 °C د 2 کلونو لپاره یا په -80 °C د اوږدې مودې ذخیره کولو لپاره.
د پراخیدو نښې نشته
1. په کټ کې د Taq DNA پولیمریز خپل فعالیت د ناسم ذخیره کولو یا د کټ د ختمیدو له امله له لاسه ورکوي.
سپارښتنه: د کټ ذخیره کولو شرایط تایید کړئ؛د PCR سیسټم ته د Taq DNA پولیمیریز مناسب مقدار بیا اضافه کړئ یا د اړوندو تجربو لپاره د ریښتیني وخت PCR کټ واخلئ.
2. په DNA کې د Taq DNA Polymerase ډیری مخنیوی کونکي شتون لري.
وړاندیز: ټیمپلیټ بیا پاک کړئ یا د کارول شوي ټیمپلیټ مقدار کم کړئ.
3. د Mg2+ غلظت مناسب ندی.
سپارښتنه: د 2× اصلي PCR مکس د Mg2+ غلظت چې موږ یې چمتو کوو 3.5mM دی.په هرصورت، د ځینو ځانګړو پریمرونو او ټیمپلیټونو لپاره، د Mg2+ غلظت ممکن لوړ وي.نو تاسو کولی شئ مستقیم MgCl2 اضافه کړئ ترڅو د Mg2+ غلظت اصلاح کړئ.دا سپارښتنه کیږي چې د اصلاح کولو لپاره هر ځل Mg2+ 0.5mM زیات کړئ.
4. د PCR امپلیفیکیشن شرایط مناسب ندي، او د پریمر ترتیب یا غلظت ناسم دی.
وړاندیز: د پریمر ترتیب درستیت تایید کړئ او پریمر خراب شوی نه وي؛که د امپلیفیکیشن سیګنال ښه نه وي، هڅه وکړئ د انیل کولو تودوخې ټیټ کړئ او د پریمر غلظت په مناسب ډول تنظیم کړئ.
5. د ټیمپلیټ مقدار ډیر لږ یا ډیر دی.
سپارښتنه: د ټیمپلیټ لینریزیشن ګریډینټ ډیلیشن ترسره کړئ، او د ریښتیني وخت PCR تجربې لپاره د غوره PCR اغیزې سره د ټیمپلیټ غلظت غوره کړئ.
NTC ډیر لوړ فلوروسینس ارزښت لري
1. Reagent ککړتیا د عملیاتو په جریان کې رامینځته کیږي.
سپارښتنه: د ریښتیني وخت PCR تجربو لپاره د نوي ریجنټونو سره بدل کړئ.
2. ککړتیا د PCR عکس العمل سیسټم چمتو کولو په جریان کې پیښیږي.
سپارښتنه: د عملیاتو په جریان کې اړین محافظتي تدابیر ونیسئ، لکه: د لیټیکس دستکشې اغوستل، د فلټر سره د پایپټ ټیپ کارول، او داسې نور.
3. د پرائمر تخریب کیږي، او د پریمرونو تخریب به د غیر مشخص پراخوالي لامل شي.
وړاندیز: د SDS-PAGE الیکٹروفورسس څخه کار واخلئ ترڅو معلومه کړي چې آیا پرائمرونه خراب شوي، او د ریښتیني وخت PCR تجربو لپاره نوي پریمرونو سره بدل کړئ.
پریمر ډیمر یا غیر مشخص امپلیفیکشن
1. د Mg2+ غلظت مناسب نه دی.
وړاندیز: د Mg2+ غلظت د 2× اصلی PCR ایزی TM مکس چې موږ یې چمتو کوو 3.5 mM دی.په هرصورت، د ځینو ځانګړو پریمرونو او ټیمپلیټونو لپاره، د Mg2+ غلظت ممکن لوړ وي.نو تاسو کولی شئ مستقیم MgCl2 اضافه کړئ ترڅو د Mg2+ غلظت اصلاح کړئ.دا سپارښتنه کیږي چې د اصلاح کولو لپاره هر ځل Mg2+ 0.5mM زیات کړئ.
2. د PCR annealing تودوخه خورا ټیټه ده.
وړاندیز: د PCR انیل کولو تودوخه هر ځل د 1 ℃ یا 2 ℃ لخوا لوړه کړئ.
3. د PCR محصول ډیر اوږد دی.
سپارښتنه: د ریښتیني وخت PCR محصول اوږدوالی باید د 100-150bp تر منځ وي ، له 500bp څخه ډیر نه وي.
4. د پرائمر تخریب کیږي، او د پریمرونو تخریب به د ځانګړي پراخوالي څرګندیدو لامل شي.
وړاندیز: د SDS-PAGE الیکٹروفورسس څخه کار واخلئ ترڅو معلومه کړي چې آیا پرائمرونه خراب شوي، او د ریښتیني وخت PCR تجربو لپاره نوي پریمرونو سره بدل کړئ.
5. د PCR سیسټم ناسم دی، یا سیسټم خورا کوچنی دی.
وړاندیز: د PCR عکس العمل سیسټم خورا کوچنی دی د کشف دقت د کمیدو لامل کیږي.دا غوره ده چې د ریښتیني وخت PCR تجربې بیا پیلولو لپاره د کمیتي PCR وسیلې لخوا وړاندیز شوي عکس العمل سیسټم وکاروئ.
د کمیتي ارزښتونو ضعیف تکرار وړتیا
1. وسیله خرابه ده.
وړاندیز: ممکن د وسیلې د هر PCR سوري تر مینځ غلطۍ شتون ولري ، چې د تودوخې مدیریت یا کشف کولو پرمهال د ضعیف تولید وړتیا لامل کیږي.مهرباني وکړئ د اړونده وسیلو لارښوونو سره سم وګورئ.
2. د نمونې پاکوالی ښه نه دی.
سپارښتنه: ناپاک نمونې به د تجربې ضعیف تولیدي وړتیا رامینځته کړي ، پدې کې د ټیمپلیټ او پریمر پاکوالی شامل دي.دا غوره ده چې ټیمپلیټ بیا پاک کړئ، او پرائمرونه د SDS-PAGE لخوا غوره شوي دي.
3. د PCR سیسټم چمتو کولو او ذخیره کولو وخت ډیر اوږد دی.
وړاندیز: د چمتووالي سمدستي وروسته د PCR تجربې لپاره د ریښتیني وخت PCR سیسټم وکاروئ ، او د ډیر وخت لپاره یې مه پریږدئ.
4. د PCR امپلیفیکیشن شرایط مناسب ندي، او د پریمر ترتیب یا غلظت ناسم دی.
وړاندیز: د پریمر ترتیب درستیت تایید کړئ او پریمر خراب شوی نه وي؛که د امپلیفیکیشن سیګنال ښه نه وي، هڅه وکړئ د انیل کولو تودوخې ټیټ کړئ او د پریمر غلظت په مناسب ډول تنظیم کړئ.
5. د PCR سیسټم ناسم دی، یا سیسټم خورا کوچنی دی.
وړاندیز: د PCR عکس العمل سیسټم خورا کوچنی دی د کشف دقت د کمیدو لامل کیږي.دا غوره ده چې د ریښتیني وخت PCR تجربې بیا پیلولو لپاره د کمیتي PCR وسیلې لخوا وړاندیز شوي عکس العمل سیسټم وکاروئ.
